丰晖生物自主研发的成骨诱导分化培养基,体外诱导MSCs细胞向成骨方向分化。该培养基包括促进MSCs向成骨方向分化的基础培养基,优质质量胎牛血清,所需的培养基添加物以及青链霉素。
二.包装组成成分
培养基名称 规格 保存方式 有效期
成骨诱导分化培养基 100ml 避光,4℃ 1个月
三.培养器皿表面的明胶包被操作流程
为了避免诱导过程中MSCs出现漂浮现象,建议对成骨诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。
1.加适量0.1%明胶到培养器皿中,能覆盖整个培养器皿底面的量即可。
2.摇匀液体使其覆盖整个培养器皿的底面。
3.将铺有0.1%明胶的培养器皿放置在超净台至少30min。
4.30 min后弃去明胶,待培养器皿晾干后,即可用于接种细胞。
包被明胶的培养器皿在无菌和明胶不蒸干的条件下,可以在4℃保存两周。
四.成骨诱导分化操作规程(以24孔板为例):
1. 原代的MSCs分离后,置于37℃,5%CO2培养箱中培养,每2-3天换液或传代。
2. 建议使用低代次的MSCs(<8代,随着传代后代次的增加,多向潜能的能力也逐渐降低)。当细胞融合度达到60-80%时,用0.25%Trypsin-EDTA进行消化进行传代。
3. 收集细胞,按照5X103cells/cm2的细胞密度接种在预先用明胶包被的孔板中,每孔培养基600μl,37℃,5%CO2培养。
4. 待细胞融合度达到60-70%,开始诱导,小心弃去原有培养基,并小心沿壁加入37℃预热的成骨诱导分化培养基。
5.每隔3天更换新鲜预热的成骨诱导分化培养基。
6.诱导2周后,为尽可能避免成骨细胞卷边,脱落,每3天全换液更换为每2天半量换液,直至诱导出现大量矿化结节。
为避免成骨诱导不成功或者分化效率低,请尽量保证MSCs纯度;不要将培养板长时间置于培养箱外观察或频繁开关培养箱;诱导培养基一定要预热;尽可能地避免晃动培养板;严格按照上述规程操作。
五.干细胞成骨诱导分化实例
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六.QC测试并证明诱导培养基有以下特性:
1.包含了MSCs向成骨方向分化需要的所有成分。
2.实验比较同类产品,茜素红染色证明其具有最佳诱导成骨能力。
3.无菌检测证明无细菌、真菌、支原体和无内毒素。
七.产品使用注意事项:
1.所有产品均需避光,2-8℃保存,有效期为1个月。
2.所有产品请于保质期内使用,超过保质期,使用后结果会受影响。
3.产品使用前需37℃预热。
4.建议在产品使用时避光操作。
本产品仅用于科研用途,不可用于诊断、 治疗、 临床、 家庭及其他用途。
