• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：URA3
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：                pML104是一个酵母细胞CAS9和gRNA表达基因敲除质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G203124105617.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               11240 bp ds-DNA     circular SYN 03-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..11240

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     CDS             1..4113

                     /codon_start=1

                     /product="N-terminal portion of Streptococcus pyogenes Cas9

                     (Zetsche et al., 2015)"

                     /label=Cas9

                     /translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEEKEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDEGA"

     CDS             4114..4134

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     terminator      4162..4349

                     /gene="S. cerevisiae ADH1"

                     /label=ADH1 terminator

                     /note="transcription terminator for the S. cerevisiae 

                     alcohol dehydrogenase 1 (ADH1) gene"

     terminator      4467..4486

                     /label=SUP4 terminator

                     /note="transcription terminator for the S. cerevisiae SUP4 

                     tRNA gene"

     promoter        complement(4568..4836)

                     /label=SNR52 promoter

                     /note="promoter for the S. cerevisiae small nucleolar RNA 

                     gene SNR52"

     rep_origin      complement(5308..5896)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(6067..6927)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(6928..7032)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     rep_origin      7059..8401

                     /label=2u ori

                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"

     promoter        8663..8878

                     /gene="S. cerevisiae URA3"

                     /label=URA3 promoter

     CDS             8879..9682

                     /codon_start=1

                     /gene="S. cerevisiae URA3"

                     /product="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required 

                     for uracil biosynthesis"

                     /label=URA3

                     /note="yeast auxotrophic marker, counterselectable with 

                     5-fluoroorotic acid (5-FOA)"

                     /translation="MSKATYKERAATHPSPVAAKLFNIMHEKQTNLCASLDVRTTKELL

                     ELVEALGPKICLLKTHVDILTDFSMEGTVKPLKALSAKYNFLLFEDRKFADIGNTVKLQ

                     YSAGVYRIAEWADITNAHGVVGPGIVSGLKQAAEEVTKEPRGLLMLAELSCKGSLSTGE

                     YTKGTVDIAKSDKDFVIGFIAQRDMGGRDEGYDWLIMTPGVGLDDKGDALGQQYRTVDD

                     VVSTGSDIIIVGRGLFAKGRDAKVEGERYRKAGWEAYLRRCGQQN"

     rep_origin      complement(9813..10268)

                     /direction=LEFT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        10540..11206

                     /gene="S. cerevisiae TDH3"

                     /label=GAP promoter

                     /note="promoter for glyceraldehyde-3-phosphate 

                     dehydrogenase"

ORIGIN

        1 atggacaaga agtattctat cggactggac atcgggacta atagcgtcgg gtgggccgtc

       61 atcactgacg agtacaaggt gccctctaag aagttcaagg tgctcgggaa caccgaccgg

      121 cattccatca agaaaaatct gatcggagct ctcctctttg attcagggga gaccgctgaa

      181 gcaacccgcc tcaagcggac tgctagacgg cggtacacca ggaggaagaa ccggatttgt

      241 taccttcaag agatattctc caacgaaatg gcaaaggtcg acgacagctt cttccatagg

      301 ctggaagaat cattcctcgt ggaagaggat aagaagcatg aacggcatcc catcttcggt

      361 aatatcgtcg acgaggtggc ctatcacgag aaatacccaa ccatctacca tcttcgcaaa

      421 aagctggtgg actcaaccga caaggcagac ctccggctta tctacctggc cctggcccac

      481 atgattaagt tcagaggcca cttcctgatc gagggcgacc tcaatcctga caatagcgat

      541 gtggataaac tgttcatcca gctggtgcag acttacaacc agctctttga agagaacccc

      601 atcaatgcaa gcggagtcga tgccaaggcc attctgtcag cccggctgtc aaagagccgc

      661 agacttgaga atcttatcgc tcagctgccg ggtgaaaaga aaaatggact gttcgggaac

      721 ctgattgctc tttcacttgg gctgactccc aatttcaagt ctaatttcga cctggcagag

      781 gatgccaagc tgcaactgtc caaggacacc tatgatgacg atctcgacaa cctcctggcc

      841 cagatcggtg accaatacgc cgaccttttc cttgctgcta agaatctttc tgacgccatc

      901 ctgctgtctg acattctccg cgtgaacact gaaatcacca aggcccctct ttcagcttca

      961 atgattaagc ggtatgatga gcaccaccag gacctgaccc tgcttaaggc actcgtccgg

     1021 cagcagcttc cggagaagta caaggaaatc ttctttgacc agtcaaagaa tggatacgcc

     1081 ggctacatcg acggaggtgc ctcccaagag gaattttata agtttatcaa acctatcctt

     1141 gagaagatgg acggcaccga agagctcctc gtgaaactga atcgggagga tctgctgcgg

     1201 aagcagcgca ctttcgacaa tgggagcatt ccccaccaga tccatcttgg ggagcttcac

     1261 gccatccttc ggcgccaaga ggacttctac ccctttctta aggacaacag ggagaagatt

     1321 gagaaaattc tcactttccg catcccctac tacgtgggac ccctcgccag aggaaatagc

     1381 cggtttgctt ggatgaccag aaagtcagaa gaaactatca ctccctggaa cttcgaagag

     1441 gtggtggaca agggagccag cgctcagtca ttcatcgaac ggatgactaa cttcgataag

     1501 aacctcccca atgagaaggt cctgccgaaa cattccctgc tctacgagta ctttaccgtg

     1561 tacaacgagc tgaccaaggt gaaatatgtc accgaaggga tgaggaagcc cgcattcctg

     1621 tcaggcgaac aaaagaaggc aattgtggac cttctgttca agaccaatag aaaggtgacc

     1681 gtgaagcagc tgaaggagga ctatttcaag aaaattgaat gcttcgactc tgtggagatt

     1741 agcggggtcg aagatcggtt caacgcaagc ctgggtacct accatgatct gcttaagatc

     1801 atcaaggaca aggattttct ggacaatgag gagaaagagg acatccttga ggacattgtc

     1861 ctgactctca ctctgttcga ggaccgggaa atgatcgagg agaggcttaa gacctacgcc

     1921 catctgttcg acgataaagt gatgaagcaa cttaaacgga gaagatatac cggatgggga

     1981 cgccttagcc gcaaactcat caacggaatc cgggacaaac agagcggaaa gaccattctt

     2041 gatttcctta agagcgacgg attcgctaat cgcaacttca tgcaacttat ccatgatgat

     2101 tccctgacct ttaaggagga catccagaag gcccaagtgt ctggacaagg tgactcactg

     2161 cacgagcata tcgcaaatct ggctggttca cccgctatta agaagggtat tctccagacc

     2221 gtgaaagtcg tggacgagct ggtcaaggtg atgggtcgcc ataaaccaga gaacattgtc

     2281 atcgagatgg ccagggaaaa ccagactacc cagaagggac agaagaacag cagggagcgg

     2341 atgaaaagaa ttgaggaagg gattaaggag ctcgggtcac agatccttaa agagcacccg

     2401 gtggaaaaca cccagcttca gaatgagaag ctctatctgt actaccttca aaatggacgc

     2461 gatatgtatg tggaccaaga gcttgatatc aacaggctct cagactacga cgtggaccac

     2521 atcgtccctc agagcttcct caaagacgac tcaattgaca ataaggtgct gactcgctca

     2581 gacaagaacc ggggaaagtc agataacgtg ccctcagagg aagtcgtgaa aaagatgaag