• 规格：20μl质粒
• 启动子：mouse U6 promoter
• 复制子：pUC ori,F1 ori,SV40 ori
• 终止子：WPRE
• 质粒分类：RNA文库质粒；RNA人源质粒；miRNA人源质粒
• 质粒大小：8994bp
• 原核抗性：Amp（100μg/ml）
• 筛选标记：EGFP,Puro
• 克隆菌株：Stbl3
• 表达宿主：293T等哺乳细胞
• 诱导方式：无需诱导
• 5测序引物：mU6-F（CAGCACAAAAGGAAACTCACC）
• 3测序引物：SV40-R（GGACTTTCCACACCTGGTTG）
• 质粒简介：          pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA质粒是在pLL3.7载体上克隆了一段非编码核苷酸序列得到的一个哺乳细胞慢病毒miRNA(MicroRNA)表达质粒。mU6启动Hsa-Let-7a-1miRNA的转录。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞，其是第三代慢病毒载体，所以也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身同时带有EGFP荧光标签和Puro抗性标记，可利用EGFP来检测转染效率，或可用流式细胞仪和嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
  
• 质粒图谱1： png/1-1FF91643462H.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported                8994 bp ds-DNA    circular SYN 09-七月-2017

DEFINITION  .

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    pLL3.7-Hsa-Let-7a-1miRNA

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 8994)

  AUTHORS   XC

  TITLE     Direct Submission

  JOURNAL   Exported 2017年7月9日 from MiaoLingPlasmid

            http://www.snapgene.com

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..8994

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        238..617

                     /note="CMV enhancer"

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        619..817

                     /note="CMV promoter"

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     LTR             835..1015

                     /note="5' LTR (truncated)"

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     misc_feature    1062..1187

                     /note="HIV-1 Psi"

                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 

                     type 1"

     misc_feature    1686..1919

                     /note="RRE"

                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 

                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 

                     cytoplasm."

     misc_feature    2446..2563

                     /note="cPPT/CTS"

                     /note="central polypurine tract and central termination 

                     sequence of HIV-1"

     promoter        2622..2933

                     /note="mU6 promoter"

                     /note="mouse U6 promoter"

     misc_feature    2949..2955

                     /note="Xho-SalI拼接点"

     misc_feature    2956..3304

                     /note="pri-hsa-miR-let-7a-1"

     misc_feature    3103..3182

                     /note="pre-hsa-let-7a-1"

     misc_feature    3103..3182

                     /note="pre-hsa-let-7a-1"

     promoter        3343..3672

                     /note="SV40 promoter"

                     /note="SV40 enhancer and early promoter"

     rep_origin      3523..3658

                     /note="SV40 ori"

                     /note="SV40 origin of replication"

     CDS             3688..4287

                     /codon_start=1

                     /gene="pac from Streptomyces alboniger"

                     /product="puromycin N-acetyltransferase"

                     /note="PuroR"

                     /note="confers resistance to puromycin"

                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER

                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA

                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS

                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"

     primer_bind     4296..4312

                     /note="KS primer"

                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants"

     protein_bind    4354..4387

                     /bound_moiety="Cre recombinase"

                     /note="loxP"

                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 

                     sequence (GCATACAT)."

     enhancer        4503..4806

                     /note="CMV enhancer"

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        4807..5010

                     /note="CMV promoter"

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     CDS             5055..5774

                     /codon_start=1

                     /product="enhanced GFP"

                     /note="EGFP"

                     /note="mammalian codon-optimized"

                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL

                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD

                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK

                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL

                     EFVTAAGITLGMDELYK"

     protein_bind    5794..5827

                     /bound_moiety="Cre recombinase"

                     /note="loxP"

                     /note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core 

                     sequence (GCATACAT)."

     misc_feature    5883..6471

                     /note="WPRE"

                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 

                     regulatory element"

     CDS             complement(6354..6365)

                     /codon_start=1

                     /product="Factor Xa recognition and cleavage site"

                     /note="Factor Xa site"

                     /translation="IEGR"

     primer_bind     complement(6474..6490)

                     /note="KS primer"

                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants"

     LTR             7000..7180

                     /note="5' LTR (truncated)"

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     rep_origin      complement(7242..7830)

                     /direction=LEFT

                     /note="ori"

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(8001..8861)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /note="AmpR"

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(8862..8966)

                     /gene="bla"

                     /note="AmpR promoter"

ORIGIN

        1 gtcgacggat cgggagatct cccgatcccc tatggtgcac tctcagtaca atctgctctg

       61 atgccgcata gttaagccag tatctgctcc ctgcttgtgt gttggaggtc gctgagtagt

      121 gcgcgagcaa aatttaagct acaacaaggc aaggcttgac cgacaattgc atgaagaatc

      181 tgcttagggt taggcgtttt gcgctgcttc gcgatgtacg ggccagatat acgcgttgac

      241 attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat

      301 atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg

      361 acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt

      421 tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag

      481 tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc

      541 attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag

      601 tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt

      661 ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc

      721 accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg

      781 gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagcgc gttttgcctg tactgggtct

      841 ctctggttag accagatctg agcctgggag ctctctggct aactagggaa cccactgctt

      901 aagcctcaat aaagcttgcc ttgagtgctt caagtagtgt gtgcccgtct gttgtgtgac

      961 tctggtaact agagatccct cagacccttt tagtcagtgt ggaaaatctc tagcagtggc

     1021 gcccgaacag ggacttgaaa gcgaaaggga aaccagagga gctctctcga cgcaggactc

     1081 ggcttgctga agcgcgcacg gcaagaggcg aggggcggcg actggtgagt acgccaaaaa