产品名称： BCA蛋白浓度测定试剂盒

规格： 500T

有效期 12个月

产品组分

BCA试剂A 100ml

BCA试剂B 3ml

蛋白标准品(BSA) 1ml

说明书 1份

储存条件

室温保存。蛋白标准品-20ºC冻存。

产品简介

BCA蛋白浓度测定试剂盒 (Enhanced BCA Protein Assay Kit)是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一，BCA法研制而成，实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。

灵敏度更高，检测浓度下限达到10µg/ml，最小检测蛋白量达到0.2µg， 待测样品体积为1-20µl。

显色速度更快，相同的样品孵育较短时间即可进行吸光度测定。

在20-1000µg/ml浓度范围内有较好的线性关系。本产品从0.1到1.0mg/ml的标准曲线参考图1。

 

图1. 试剂盒蛋白标准曲线的效果图。

（左图为加入BCA工作液后37ºC分别孵育30分钟后的吸光度实测效果图，右图为37ºC孵育60分钟时的实拍显色效果图。图中数据仅供参考，实际的检测效果可能会略有不同。）

BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。

每个试剂盒可以检测500个样品。

实验原理

在碱性环境下蛋白质分子中肽键结构与Cu²⁺络合并将Cu²⁺还原成Cu¹⁺。BCA特异地与Cu¹⁺结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nm处有最大的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比，可以根据吸收值测定蛋白质浓度。

使用方法

自备仪器和用品： 酶标仪/分光光度计、96孔板、移液器、蒸馏水、PBS缓冲液。

1. 蛋白标准品的准备

取适量5mg/ml蛋白标准品，稀释至终浓度为1mg/ml。例如取20µl 5mg/ml蛋白标准品，加入80µl稀释液即可配制成1mg/ml蛋白标准品。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9% NaCl或PBS稀释标准品。稀释后的1mg/ml蛋白标准品可以在-20ºC长期保存。

2. BCA工作液的配制

根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(试剂A:试剂B=50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加100µl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液在室温下可稳定保存24小时。

3. 蛋白浓度检测

a. 将标准品按0、1、2、4、6、8、10µl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到10µl，相当于标准品浓度分别为0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml。

b. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中。如果样品不足10µl，加标准品稀释液补足到10µl。请注意记录样品体积。

c. 各孔加入200µl BCA工作液，37ºC放置20-30分钟。

注: 也可以室温放置2小时，或60ºC放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。

d. 用酶标仪测定A562，或540-595nm之间的波长的吸光度。

e. 根据标准曲线和使用的样品体积计算出样品的蛋白浓度。

注意事项

1. 酶标仪测定波长在540-595nm之间，562nm最佳，需使用96孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但测定时，需根据比色皿的最小检测体积，适当加大BCA工作液的用量，使其不小于最小检测体积，样品和标准品的用量应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。

2. 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热，但是切勿过热。

3. EDTA浓度必须小于10mM，不兼容EGTA。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。