CD8+细胞毒性T细胞通过直接杀伤作用，主要负责对靶细胞的清除。通过清除细胞内的病原体，如病毒、一些细菌和寄生虫，发挥调节，实现机体免疫应答的双重作用。一旦发现感染细胞，CD8+T细胞通过靶向释放T细胞内含有特殊溶解颗粒的效应蛋白来启动凋亡。本产品CD8+ T细胞是通过免疫细胞磁珠分离的方法从外周血单个核细胞中分离出来。正确地复苏冻存细胞是保证细胞功能与活力的关键，采用正确快速的操作手法以确保细胞有更高的存活率。

 

材料

缓冲液:

• PBS或DPBS

• 0.5% HSA或FBS或BSA（比例视需求可调整）

 

其他:

• 75% 酒精

• 冻存细胞

• 无菌离心管

• 巴氏吸管

 

设备:

• 恒温水浴锅

• 生物安全柜

• 液氮罐

• 微量移液器

• 离心机

 

操作步骤

1. 在37℃水浴锅中预热缓冲液和培养基。

2. 从液氮罐中取出细胞，镊子夹住冻存管帽，移动摇晃。为防止污染，水浴解冻时注意液面不能漫过冻存管的盖子接触口，不可剧烈晃动。

3. 据冻存管规格大小，解冻时间大约为2min。规格大，可适当延长解冻时间。

4. 当管子内还保留少量冰晶时将冻存管移出水浴锅，用75%的酒精进行消毒，无菌纸擦拭，然后转移到生物安全柜中。

5. 操作台内，可先在无菌的15ml离心管中加入少量缓冲液，将冻存管中的细胞悬液取出加入到15ml离心管，并润洗枪头。巴氏吸管吸取Buffer润洗冻存管2-3次，尽量不接触管口避免污染。

6. 使细胞悬液达到至8-12ml，混匀，取一部分细胞进行计数活力检测。

7. 将离心管中的细胞400g、10min室温离心。

8. 弃去细胞上清液（无菌操作，避免吸到细胞）。

9. 如果细胞沉淀较多，可以先加入少量Buffer或培养基，吹散细胞混匀，再补适量液体混匀。（一次性加较多液体混匀时可能会吹打不均匀或成团较多，故可选择分次加液）

10. 根据实验需求将细胞悬液转移到适当的培养皿或者培养瓶中，以待进一步使用。

注意事项：

1. 在速溶细胞时，可用EP手套包裹住冻存管进行溶解，防止污染。

2. 操作尽可能轻缓，避免机械损伤，润洗冻存管过程中可逐滴加入缓冲液，减

少气泡产生。

3. 计数：①取样时样本一定要混合均匀；②稀释的样本浓度建议10^6-10^7/ml之间；③采用低吸附的枪头等耗材，可在EP手套上操作染色，以减少粘附。