储存条件：附件PMSF-20℃，-20℃

有效期： 1年

所属分类：裂解液

产品简介：

RIPA 裂解液（RIPA Lysis Buffer）是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强效、中效、弱效三类。RIPA裂解液（强效）的主要成分为50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用丰晖生物生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。本产品由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

操作步骤：

如发现 RIPA 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1 ml RIPA 加入10 μl PMSF，使 PMSF 的最终浓度为1 mM，混匀备用（PMSF现用现加）。

1. 样品前处理

a) 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b) 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/管，然后再裂解。

c) 对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20 mg组织加入150-250 μl裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量）。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2. 后处理

将裂解后的样品10000-14000 g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

注意事项：

裂解样品的所有步骤都需在冰上或4 ℃进行；RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子；本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。