2、组织来源：关节软骨

 

3、产品规格：25cm2培养瓶/5×105 cells/瓶

 

4、细胞简介：

 

人软骨细胞分离自关节软骨组织；关节软骨属于透明软骨，表面光滑，呈淡蓝色，有光泽，它是由一种特殊的叫做致密结缔组织的胶原纤维构成的基本框架，这种框架呈半环形，类似拱形球门，底端紧紧附着在下面的骨质上，上端朝向关节面，这种结构使关节软骨紧紧与骨结合起来而不会掉下来，同时受到压力的时候，还可以有少许的变形，起到缓冲压力的作用。

 

本公司生产的SV40T永生化人关节软骨细胞采用胶原酶联合中性蛋白酶消化法制备而来，细胞总量约为5×105个/瓶；细胞经II型胶原蛋白免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

 

5、培养基信息：

 

培养基内容：基础培养基，FBS，Penicillin，Streptomycin等；

 

为保证细胞体外培养最佳状态我们推荐使用永生化人关节软骨细胞专用培养基作为体外永生化人关节软骨细胞专用培养基。

 

二．细胞发货及鉴定图片

 

（1）细胞状态照片：细胞发货时发送至少3张细胞发货前白光电子照片；

 

（2）细胞鉴定照片：提供一套细胞鉴定图片（可用于发文章）；若要用于文章多套使用，需额外增加鉴定费用，提供3套鉴定图片；

 

 

三．使用方法

 

在技术部标准操作流程下，永生化人软骨细胞可传10-20代左右；建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

 

一、客户收到细胞操作如下

 

1.取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态；

 

2.观察细胞生长情况，细胞密度低于80%时，贴壁细胞倒去瓶中培养液，留下8ml作用继续培养；细胞密度大于80%时，即可进行传代；

 

3.吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS洗涤3次；

 

4.添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，37℃温浴2-3min左右；倒置显微镜下观察细胞回缩变圆，透亮时即可终止消化，加入双倍完全培养液轻轻吹打细胞使其变成单细胞悬液；

 

5.收集细胞悬液至离心管内，1000rpm离心5min，观察细胞沉淀；

 

6.加入1ml的完全培养液，轻轻吹打成单细胞悬液，均匀分配至细胞培养瓶中，初次传代建议按照1：2比例进行

 

7.待细胞完全贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

 

二、细胞冻存管复苏

 

1.提前室温预热培养基，将水浴锅调至37℃；

 

2.在超净工作台内提前准备好15ml离心管，并加入5ml的完全培养基；

 

3.将冻存管快速放入水浴锅中，不断晃动冻存管，直至管内冰块全部融化

 

4.然后快速取出，喷洒酒精，转移至超净工作台；

 

5.拧开冻存管螺纹盖，用移液枪将细胞悬液轻轻吸出，转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

 

离心结束后，观察有无细胞沉淀，将上清弃去，加入1ml新鲜的完全培养基，用移液枪轻轻吹打成细胞悬液；将细胞悬液转移至T25培养瓶中，T25培养瓶建议培养基加入量5-7ml，轻轻晃动培养瓶使细胞分散均匀，置于培养箱中培养。