• 规格：20μl质粒
• 启动子：EF-1α promoter
• 终止子：WPRE
• 质粒大小：14229bp
• 原核抗性：N-nucleoplasmin NLS，C-SV40 NLS
• 筛选标记：博来霉素Zeo，杀稻瘟菌素Blast
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：           Lenti-dCas9-KRAB-blast质粒是一个慢病毒过表达质粒，EF-1α 启动子驱动dCas9-KRAB蛋白片段的表达，可用于哺乳细胞的基因编辑实验。本质粒的参考文献是：Multiplexed Engineering and Analysis of Combinatorial Enhancer Activity in Single Cells. 
• 质粒图谱1： png/1-1G026160622C1.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               14229 bp ds-DNA     circular SYN 26-OCT-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 14229)

            http://www.fenghbio.cn

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..14229

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        238..617

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        619..817

                     /label=CMV promoter

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     LTR             835..1015

                     /label=5' LTR (truncated)

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     misc_feature    1062..1187

                     /label=HIV-1 Psi

                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 

                     type 1"

     misc_feature    1680..1913

                     /label=RRE

                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 

                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 

                     cytoplasm."

     misc_feature    2440..2557

                     /label=cPPT/CTS

                     /note="central polypurine tract and central termination 

                     sequence of HIV-1"

     promoter        2687..3865

                     /label=EF-1-alpha promoter

                     /note="strong constitutive promoter for human elongation 

                     factor EF-1-alpha"

     CDS             3881..3928

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /label=nucleoplasmin NLS

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     CDS             3929..8029

                     /codon_start=1

                     /product="catalytically dead mutant of the Cas9 

                     endonuclease from the Streptococcus pyogenes Type II 

                     CRISPR/Cas system"

                     /label=dCas9

                     /note="RNA-guided DNA-binding protein that lacks 

                     endonuclease activity due to the D10A mutation in the RuvC 

                     catalytic domain and the N863A mutation in the HNH 

                     catalytic domain"

                     /translation="DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKARGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             8084..8104

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             8147..8341

                     /codon_start=1

                     /gene="ZNF10"

                     /gene_synonym="KOX1"

                     /product="Kruppel-associated box (KRAB) transcriptional 

                     repression domain from the human zinc finger protein ZNF10 

                     (Margolin et al., 1994)"

                     /label=KRAB

                     /translation="RTLVTFKDVFVDFTREEWKLLDTAQQILYRNVMLENYKNLVSLGY

                     QLTKPDVILRLEKGEEPWLV"

     CDS             8408..8428

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             8444..8497

                     /codon_start=1

                     /product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid 

                     protein"

                     /label=T2A

                     /note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond 

                     between the Gly and Pro residues, yielding separate 

                     polypeptides."

                     /translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"

     CDS             8498..8896

                     /codon_start=1

                     /gene="Aspergillus terreus BSD"

                     /product="blasticidin S deaminase"

                     /label=Blast

                     /note="confers resistance to blasticidin"

                     /translation="MAKPLSQEESTLIERATATINSIPISEDYSVASAALSSDGRIFTG

                     VNVYHFTGGPCAELVVLGTAAAAAAGNLTCIVAIGNENRGILSPCGRCRQVLLDLHPGI

                     KAIVKDSDGQPTAVGIRELLPSGYVWEG"

     misc_feature    8921..9509

                     /label=WPRE

                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 

                     regulatory element"

     LTR             10034..10214

                     /label=5' LTR (truncated)

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     polyA_signal    10246..10470

                     /label=bGH poly(A) signal

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     rep_origin      10516..10944

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        10958..11287

                     /label=SV40 promoter

                     /note="SV40 enhancer and early promoter"

     rep_origin      11138..11273

                     /label=SV40 ori

                     /note="SV40 origin of replication"

     promoter        11335..11382

                     /label=EM7 promoter

                     /note="synthetic bacterial promoter "

     CDS             11401..11775

                     /codon_start=1

                     /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"

                     /product="antibiotic-binding protein"

                     /label=Zeo

                     /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and