• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：LEU2
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：               pML107是一个酵母CAS9和gRNA表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G203122H4961.png

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LOCUS       Exported               12366 bp ds-DNA     circular SYN 03-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..12366

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     CDS             complement(664..1758)

                     /codon_start=1

                     /gene="S. cerevisiae LEU2"

                     /product="3-isopropylmalate dehydrogenase, required for 

                     leucine biosynthesis"

                     /label=LEU2

                     /note="yeast auxotrophic marker"

                     /translation="MSAPKKIVVLPGDHVGQEITAEAIKVLKAISDVRSNVKFDFENHL

                     IGGAAIDATGVPLPDEALEASKKADAVLLGAVGGPKWGTGSVRPEQGLLKIRKELQLYA

                     NLRPCNFASDSLLDLSPIKPQFAKGTDFVVVRELVGGIYFGKRKEDDGDGVAWDSEQYT

                     VPEVQRITRMAAFMALQHEPPLPIWSLDKANVLASSRLWRKTVEETIKNEFPTLKVQHQ

                     LIDSAAMILVKNPTHLNGIIITSNMFGDIISDEASVIPGSLGLLPSASLASLPDKNTAF

                     GLYEPCHGSAPDLPKNKVNPIATILSAAMMLKLSLNLPEEGKAIEDAVKKVLDAGIRTG

                     DLGGSNSTTEVGDAVAEEVKKILA"

     promoter        complement(1759..2166)

                     /gene="S. cerevisiae LEU2"

                     /label=LEU2 promoter

     rep_origin      complement(2467..2922)

                     /direction=LEFT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        3089..3107

                     /label=T7 promoter

                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"

     promoter        3194..3860

                     /gene="S. cerevisiae TDH3"

                     /label=GAP promoter

                     /note="promoter for glyceraldehyde-3-phosphate 

                     dehydrogenase"

     regulatory      3889..3898

                     /regulatory_class="other"

                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 

                     of translation (Kozak, 1987)"

     CDS             3895..7998

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             8008..8028

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     terminator      8056..8243

                     /gene="S. cerevisiae ADH1"

                     /label=ADH1 terminator

                     /note="transcription terminator for the S. cerevisiae 

                     alcohol dehydrogenase 1 (ADH1) gene"

     terminator      8361..8380

                     /label=SUP4 terminator

                     /note="transcription terminator for the S. cerevisiae SUP4 

                     tRNA gene"

     promoter        complement(8462..8730)

                     /label=SNR52 promoter

                     /note="promoter for the S. cerevisiae small nucleolar RNA 

                     gene SNR52"

     rep_origin      complement(9202..9790)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(9961..10821)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(10822..10926)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     rep_origin      10953..12299

                     /label=2u ori

                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"

ORIGIN

        1 tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca

       61 cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg

      121 ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc

      181 accatatcga ctacgtcgtt aaggccgttt ctgacagagt aaaattcttg agggaacttt

      241 caccattatg ggaaatggtt caagaaggta ttgacttaaa ctccatcaaa tggtcaggtc

      301 attgagtgtt ttttatttgt tgtatttttt tttttttaga gaaaatcctc caatatataa

      361 attaggaatc atagtttcat gattttctgt tacacctaac tttttgtgtg gtgccctcct

      421 ccttgtcaat attaatgtta aagtgcaatt ctttttcctt atcacgttga gccattagta

      481 tcaatttgct tacctgtatt cctttacatc ctcctttttc tccttcttga taaatgtatg

      541 tagattgcgt atatagtttc gtctacccta tgaacatatt ccattttgta atttcgtgtc

      601 gtttctatta tgaatttcat ttataaagtt tatgtacaaa tatcataaaa aaagagaatc

      661 tttttaagca aggattttct taacttcttc ggcgacagca tcaccgactt cggtggtact

      721 gttggaacca cctaaatcac cagttctgat acctgcatcc aaaacctttt taactgcatc

      781 ttcaatggcc ttaccttctt caggcaagtt caatgacaat ttcaacatca ttgcagcaga

      841 caagatagtg gcgatagggt tgaccttatt ctttggcaaa tctggagcag aaccgtggca

      901 tggttcgtac aaaccaaatg cggtgttctt gtctggcaaa gaggccaagg acgcagatgg

      961 caacaaaccc aaggaacctg ggataacgga ggcttcatcg gagatgatat caccaaacat

     1021 gttgctggtg attataatac catttaggtg ggttgggttc ttaactagga tcatggcggc

     1081 agaatcaatc aattgatgtt gaaccttcaa tgtaggaaat tcgttcttga tggtttcctc

     1141 cacagttttt ctccataatc ttgaagaggc caaaacatta gctttatcca aggaccaaat

     1201 aggcaatggt ggctcatgtt gtagggccat gaaagcggcc attcttgtga ttctttgcac

     1261 ttctggaacg gtgtattgtt cactatccca agcgacacca tcaccatcgt cttcctttct

     1321 cttaccaaag taaatacctc ccactaattc tctgacaaca acgaagtcag tacctttagc

     1381 aaattgtggc ttgattggag ataagtctaa aagagagtcg gatgcaaagt tacatggtct

     1441 taagttggcg tacaattgaa gttctttacg gatttttagt aaaccttgtt caggtctaac

     1501 actacctgta ccccatttag gaccacccac agcacctaac aaaacggcat cagccttctt

     1561 ggaggcttcc agcgcctcat ctggaagtgg aacacctgta gcatctatag cagcaccacc

     1621 aattaaatga ttttcgaaat cgaacttgac attggaacga acatcagaaa tagctttaag

     1681 aaccttaatg gcttcggctg tgatttcttg accaacgtgg tcacctggca aaacgacgat

     1741 cttcttaggg gcagacatta gaatggtata tccttgaaat atatatatat atattgctga

     1801 aatgtaaaag gtaagaaaag ttagaaagta agacgattgc taaccaccta ttggaaaaaa

     1861 caataggtcc ttaaataata ttgtcaactt caagtattgt gatgcaagca tttagtcatg

     1921 aacgcttctc tattctatat gaaaagccgg ttccggcgct ctcacctttc ctttttctcc

     1981 caatttttca gttgaaaaag gtatatgcgt caggcgacct ctgaaattaa caaaaaattt