• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：嘌呤霉素Puro，绿色荧光蛋白EGFP
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 表达宿主：哺乳细胞
• 质粒简介：                pLKO.1-EGFP-Puro是一个哺乳细胞慢病毒干扰RNA质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G21416142L45.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported                8301 bp ds-DNA     circular SYN 14-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..8301

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     promoter        7..507

                     /label=hPGK promoter

                     /note="human phosphoglycerate kinase 1 promoter"

     CDS             529..1128

                     /codon_start=1

                     /gene="pac from Streptomyces alboniger"

                     /product="puromycin N-acetyltransferase"

                     /label=PuroR

                     /note="confers resistance to puromycin"

                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER

                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA

                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS

                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"

     LTR             1256..1489

                     /label=3' LTR (Delta-U3)

                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from

                     HIV-1"

     polyA_signal    1561..1682

                     /label=SV40 poly(A) signal

                     /note="SV40 polyadenylation signal"

     rep_origin      1722..1857

                     /label=SV40 ori

                     /note="SV40 origin of replication"

     rep_origin      2064..2519

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        2545..2649

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     CDS             2650..3510

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     rep_origin      3681..4269

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     promoter        4738..4964

                     /label=RSV promoter

                     /note="Rous sarcoma virus enhancer/promoter"

     LTR             4965..5145

                     /label=5' LTR (truncated)

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     misc_feature    5192..5317

                     /label=HIV-1 Psi

                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 

                     type 1"

     misc_feature    5810..6043

                     /label=RRE

                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 

                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 

                     cytoplasm."

     promoter        6570..6810

                     /label=U6 promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     enhancer        6832..7135

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        7136..7339

                     /label=CMV promoter

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     regulatory      7368..7377

                     /regulatory_class="other"

                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 

                     of translation (Kozak, 1987)"

     CDS             7374..8093

                     /codon_start=1

                     /product="enhanced GFP"

                     /label=EGFP

                     /note="mammalian codon-optimized"

                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL

                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD

                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK

                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLL

                     EFVTAAGITLGMDELYK"

     misc_feature    8132..8249

                     /label=cPPT/CTS

                     /note="central polypurine tract and central termination 

                     sequence of HIV-1"

ORIGIN

        1 ttggggttgc gccttttcca aggcagccct gggtttgcgc agggacgcgg ctgctctggg

       61 cgtggttccg ggaaacgcag cggcgccgac cctgggtctc gcacattctt cacgtccgtt

      121 cgcagcgtca cccggatctt cgccgctacc cttgtgggcc ccccggcgac gcttcctgct

      181 ccgcccctaa gtcgggaagg ttccttgcgg ttcgcggcgt gccggacgtg acaaacggaa

      241 gccgcacgtc tcactagtac cctcgcagac ggacagcgcc agggagcaat ggcagcgcgc

      301 cgaccgcgat gggctgtggc caatagcggc tgctcagcag ggcgcgccga gagcagcggc

      361 cgggaagggg cggtgcggga ggcggggtgt ggggcggtag tgtgggccct gttcctgccc

      421 gcgcggtgtt ccgcattctg caagcctccg gagcgcacgt cggcagtcgg ctccctcgtt

      481 gaccgaatca ccgacctctc tccccagggg gatccaccgg agcttaccat gaccgagtac

      541 aagcccacgg tgcgcctcgc cacccgcgac gacgtcccca gggccgtacg caccctcgcc

      601 gccgcgttcg ccgactaccc cgccacgcgc cacaccgtcg atccggaccg ccacatcgag

      661 cgggtcaccg agctgcaaga actcttcctc acgcgcgtcg ggctcgacat cggcaaggtg

      721 tgggtcgcgg acgacggcgc cgcggtggcg gtctggacca cgccggagag cgtcgaagcg

      781 ggggcggtgt tcgccgagat cggcccgcgc atggccgagt tgagcggttc ccggctggcc

      841 gcgcagcaac agatggaagg cctcctggcg ccgcaccggc ccaaggagcc cgcgtggttc

      901 ctggccaccg tcggcgtctc gcccgaccac cagggcaagg gtctgggcag cgccgtcgtg

      961 ctccccggag tggaggcggc cgagcgcgcc ggggtgcccg ccttcctgga gacctccgcg

     1021 ccccgcaacc tccccttcta cgagcggctc ggcttcaccg tcaccgccga cgtcgaggtg

     1081 cccgaaggac cgcgcacctg gtgcatgacc cgcaagcccg gtgcctgacg cccgccccac

     1141 gacccgcagc gcccgaccga aaggagcgca cgaccccatg catcggtacc tttaagacca

     1201 atgacttaca aggcagctgt agatcttagc cactttttaa aagaaaaggg gggactggaa

     1261 gggctaattc actcccaacg aagacaagat ctgctttttg cttgtactgg gtctctctgg

     1321 ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag ggaacccact gcttaagcct

     1381 caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc gtctgttgtg tgactctggt

     1441 aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa tctctagcag tagtagttca

     1501 tgtcatctta ttattcagta tttataactt gcaaagaaat gaatatcaga gagtgagagg

     1561 aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca

     1621 aataaagcat ttttttcact gcattctagt tgtggtttgt ccaaactcat caatgtatct

     1681 tatcatgtct ggctctagct atcccgcccc taactccgcc catcccgccc ctaactccgc

     1741 ccagttccgc ccattctccg ccccatggct gactaatttt ttttatttat gcagaggccg

     1801 aggccgcctc ggcctctgag ctattccaga agtagtgagg aggctttttt ggaggcctag

     1861 ggacgtaccc aattcgccct atagtgagtc gtattacgcg cgctcactgg ccgtcgtttt

     1921 acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc

     1981 ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt

     2041 gcgcagcctg aatggcgaat gggacgcgcc ctgtagcggc gcattaagcg cggcgggtgt

     2101 ggtggttacg cgcagcgtga ccgctacact tgccagcgcc ctagcgcccg ctcctttcgc

     2161 tttcttccct tcctttctcg ccacgttcgc cggctttccc cgtcaagctc taaatcgggg

     2221 gctcccttta gggttccgat ttagtgcttt acggcacctc gaccccaaaa aacttgatta

     2281 gggtgatggt tcacgtagtg ggccatcgcc ctgatagacg gtttttcgcc ctttgacgtt

     2341 ggagtccacg ttctttaata gtggactctt gttccaaact ggaacaacac tcaaccctat

     2401 ctcggtctat tcttttgatt tataagggat tttgccgatt tcggcctatt ggttaaaaaa

     2461 tgagctgatt taacaaaaat ttaacgcgaa ttttaacaaa atattaacgc ttacaattta

     2521 ggtggcactt ttcggggaaa tgtgcgcgga acccctattt gtttattttt ctaaatacat

     2581 tcaaatatgt atccgctcat gagacaataa ccctgataaa tgcttcaata atattgaaaa

     2641 aggaagagta tgagtattca acatttccgt gtcgccctta ttcccttttt tgcggcattt

     2701 tgccttcctg tttttgctca cccagaaacg ctggtgaaag taaaagatgc tgaagatcag

     2761 ttgggtgcac gagtgggtta catcgaactg gatctcaaca gcggtaagat ccttgagagt

     2821 tttcgccccg aagaacgttt tccaatgatg agcactttta aagttctgct atgtggcgcg

     2881 gtattatccc gtattgacgc cgggcaagag caactcggtc gccgcataca ctattctcag

     2941 aatgacttgg ttgagtactc accagtcaca gaaaagcatc ttacggatgg catgacagta

     3001 agagaattat gcagtgctgc cataaccatg agtgataaca ctgcggccaa cttacttctg

     3061 acaacgatcg gaggaccgaa ggagctaacc gcttttttgc acaacatggg ggatcatgta

     3121 actcgccttg atcgttggga accggagctg aatgaagcca taccaaacga cgagcgtgac

     3181 accacgatgc ctgtagcaat ggcaacaacg ttgcgcaaac tattaactgg cgaactactt