• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 克隆菌株：大肠杆菌DH5α
• 质粒简介：            pCAG Cas9-2A-Citrine是一个哺乳细胞基因编辑Cas9表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1P106115012563.png

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LOCUS       Exported                9886 bp ds-DNA     circular SYN 06-JAN-2018

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..9886

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        5..384

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        386..661

                     /label=chicken beta-actin promoter

     intron          662..1674

                     /label=chimeric intron

                     /note="chimera between introns from chicken beta-actin and 

                     rabbit beta-globin"

     regulatory      1789..1798

                     /regulatory_class="other"

                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 

                     of translation (Kozak, 1987)"

     CDS             1801..1821

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             1846..5946

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="DKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             5947..5994

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /label=nucleoplasmin NLS

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     CDS             6010..6063

                     /codon_start=1

                     /product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid 

                     protein"

                     /label=T2A

                     /note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond 

                     between the Gly and Pro residues, yielding separate 

                     polypeptides."

                     /translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"

     CDS             6070..6786

                     /codon_start=1

                     /product="enhanced variant of YFP (Heikal et al., 2001)"

                     /label=Citrine

                     /note="mammalian codon-optimized"

                     /translation="MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL

                     KFICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGLMCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD

                     GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK

                     VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSYQSALSKDPNEKRDHMVLL

                     EFVTAAGITLGMDELYK"

     polyA_site      6943..6998

                     /label=-beta-globin poly(A) signal

                     /note="rabbit beta-globin polyadenylation signal"

     promoter        7562..7757

                     /label=SV40 promoter

                     /note="SV40 early promoter"

     rep_origin      7608..7743

                     /label=SV40 ori

                     /note="SV40 origin of replication"

     polyA_signal    7763..7897

                     /label=SV40 poly(A) signal

                     /note="SV40 polyadenylation signal"

     rep_origin      complement(8136..8724)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(8895..9755)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(9756..9860)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

ORIGIN

        1 ggtcgacatt gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat

       61 agcccatata tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg

      121 cccaacgacc cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata

      181 gggactttcc attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta

      241 catcaagtgt atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc

      301 gcctggcatt atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac

      361 gtattagtca tcgctattac catggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc

      421 atctcccccc cctccccacc cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca

      481 gcgatggggg cggggggggg gggggcgcgc gccaggcggg gcggggcggg gcgaggggcg

      541 gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag agcggcgcgc tccgaaagtt

      601 tccttttatg gcgaggcggc ggcggcggcg gccctataaa aagcgaagcg cgcggcgggc

      661 gggagtcgct gcgttgcctt cgccccgtgc cccgctccgc gccgcctcgc gccgcccgcc

      721 ccggctctga ctgaccgcgt tactcccaca ggtgagcggg cgggacggcc cttctcctcc

      781 gggctgtaat tagcgcttgg tttaatgacg gctcgtttct tttctgtggc tgcgtgaaag

      841 ccttaaaggg ctccgggagg gccctttgtg cgggggggag cggctcgggg ggtgcgtgcg

      901 tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg cccggcggct gtgagcgctg

      961 cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc

     1021 ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg

     1081 tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct gtaacccccc cctgcacccc

     1141 cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtac ggggcgtggc

     1201 gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg

     1261 ccgcctcggg ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg gcccccggag cgccggcggc

     1321 tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag

     1381 ggacttcctt tgtcccaaat ctgtgcggag ccgaaatctg ggaggcgccg ccgcaccccc

     1441 tctagcgggc gcggggcgaa gcggtgcggc gccggcagga aggaaatggg cggggagggc

     1501 cttcgtgcgt cgccgcgccg ccgtcccctt ctccctctcc agcctcgggg ctgtccgcgg

     1561 ggggacggct gccttcgggg gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc

     1621 ggcggctcta gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg

     1681 ggcaacgtgc tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattgct cgagagttcg

     1741 aagccttaag tacgcgtagg cgcgccttaa ttaacgttta aacgctaggc caccatggcc

     1801 ccaaagaaga agcggaaggt cggtatccac ggagtcccag cagccgacaa gaagtacagc

     1861 atcggcctgg acatcggcac caactctgtg ggctgggccg tgatcaccga cgagtacaag

     1921 gtgcccagca agaaattcaa ggtgctgggc aacaccgacc ggcacagcat caagaagaac

     1981 ctgatcggag ccctgctgtt cgacagcggc gaaacagccg aggccacccg gctgaagaga

    &nbs