• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：红霉素Erm
• 克隆菌株：大肠杆菌DH5α
• 表达宿主：枯草杆菌
• 质粒简介：        pJMP1质粒是一个枯草杆菌基因编辑质粒。Bacillus subtilis dCas9 expression vector; integrates into lacA/ganA。dcas9 was PCR-amplified from pdCas9-bacteria (Addgene #44249) using primers containing BamHI-compatible BsaI sites, digested with BsaI, then ligated into plasmid pAX01 digested with BamHI to generate pJMP1。
  
  A Comprehensive, CRISPR-based Functional Analysis of Essential Genes in Bacteria. 
  Peters JM, Colavin A, Shi H, Czarny TL, Larson MH, Wong S, Hawkins JS, Lu CH, Koo BM, Marta E, Shiver AL, Whitehead EH, Weissman JS, Brown ED, Qi LS, Huang KC, Gross CA
  Cell. 2016 Jun 2;165(6):1493-506. doi: 10.1016/j.cell.2016.05.003. Epub 2016 May 26.  PubMed  Journal
• 质粒图谱1： jpg/9-1P514105Z0111.jpg

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               12080 bp ds-DNA     circular SYN 14-MAY-2018

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..12080

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     CDS             1087..1278

                     /codon_start=1

                     /gene="rop"

                     /product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy

                     number"

                     /note="rop"

                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA

                     DELYRSCLARFGDDGENL"

     misc_feature    1380..1520

                     /note="bom"

                     /note="basis of mobility region from pBR322"

     rep_origin      complement(1706..2294)

                     /direction=LEFT

                     /note="ori"

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(2465..3325)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /note="AmpR"

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(3326..3430)

                     /gene="bla"

                     /note="AmpR promoter"

     CDS             complement(3541..3948)

                     /codon_start=1

                     /note="'lacA"

                     /translation="MKDYATVIDVKTASVEAVYQEDFYARTPAVTSHEYQQGKAYFIGA

                     RLEDQFQRDFYEGLITDLSLSPVFPVRHGKGVSVQARQDQDNDYIFVMNFTEEKQLVTF

                     DQSVKDIMTGDILSGDLTMEKYEVRIVVNTH"

     terminator      4074..4108

                     /note="lambda t0 terminator"

                     /note="minimal transcription terminator from phage lambda 

                     (Scholtissek and Grosse, 1987)"

     CDS             complement(4140..5264)

                     /codon_start=1

                     /note="bme xylR"

                     /translation="MNQKLILDEILKNSPVSRATLSEITGLNKSTVSSQVNTLLEKDFI

                     FEIGAGQSRGGRRPVMLVFNKNAGYSIGIDIGVDYLNGILTDLEGNIILEKTSDLSSSS

                     ASEVKEILFALIHGFVTHMPESPYGLVGIGICVPGLVDRHQQIIFMPNLNWNIKDLQFL

                     IESEFNVPVFVENEANAGAYGEKVFGMTKNYENIVYISINIGIGTGLVINNELYKGVQG

                     FSGEMGHMTIDFNGPKCSCGNRGCWELYASEKALLASLSKEEKNISRKEIVERANKNDV

                     EMLNALQNFGFYIGIGLTNILNTFDIEAVILRNHIIESHPIVLNTIKNEVSSRVHSHLD

                     NKCELLPSSLGKNAPALGAVSIVIDSFLSVTPIS"

     CDS             5580..9686

                     /codon_start=1

                     /product="catalytically dead mutant of the Cas9 

                     endonuclease from the Streptococcus pyogenes Type II 

                     CRISPR/Cas system"

                     /note="dCas9"

                     /note="RNA-guided DNA-binding protein that lacks 

                     endonuclease activity due to the D10A mutation in the RuvC 

                     catalytic domain and the H840A mutation in the HNH 

                     catalytic domain"

                     /translation="MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     terminator      9710..9781

                     /note="rrnB T1 terminator"

                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 

                     gene"

     terminator      9797..9824

                     /note="T7Te terminator"

                     /note="phage T7 early transcription terminator"

     promoter        complement(9899..10003)

                     /gene="bla"

                     /note="AmpR promoter"

     CDS             10382..11119

                     /codon_start=1

                     /note="Erm"

                     /translation="MNKNIKYSQNFLTSEKVLNQIIKQLNLKETDTVYEIGTGKGHLTT

                     KLAKISKQVTSIELDSHLFNLSSEKLKLNTRVTLIHQDILQFQFPNKQRYKIVGSIPYH

                     LSTQIIKKVVFESHASDIYLIVEEGFYKRTLDIHRTLGLLLHTQVSIQQLLKLPAECFH

                     PKPKVNSVLIKLTRHTTDVPDKYWKLYTYFVSKWVNREYRQLFTKNQFHQAMKHAKVNN

                     LSTVTYEQVLSIFNSYLLFNGRK"

     terminator      11289..11375

                     /gene="Escherichia coli rrnB"

                     /note="rrnB T1 terminator"

                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB 

                     gene"

     terminator      11394..11421

                     /note="rrnB T2 terminator"

                     /note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB 

                     gene"

     terminator      11501..11535

                     /note="lambda t0 terminator"

                     /note="minimal transcription terminator from phage lambda 

                     (Scholtissek and Grosse, 1987)"

     CDS             complement(11559..12074)

                     /codon_start=1

                     /note="lacA'"

                     /translation="MSKLEKTHVTKAKFMLHGGDYNPDQWLDRPDILADDIKLMKLSHT

                     NTFSVGIFAWSALEPEEGVYQFEWLDDIFERIHSIGGRVILATPSGARPAWLSQTYPEV

                     LRVNASRVKQLHGGRHNHCLTSKVYREKTRHINRLLAERYGHHPALLMWHISNEYGGDC

                     HCESMRPL"

ORIGIN

        1 atcctgatat tgtctgcatt tgcgccggag caaaccaaaa acctggtgag acacgccttg

       61 aattagtaga aaagaacttg aagattttca aaggcatcgt tagtgaagtc atggcgagcg

      121 gatttgacgg cattttctta gtcgcgacgc gaggctggat ggccttcccc attatgattc

      181 ttctcgcttc cggcggcatc gggatgcccg cgttgcaggc catgctgtcc aggcaggtag

      241 atgacgacca tcagggacag cttcaaggat cgctcgcggc tcttaccagc ctaacttcga

      301 tcactggacc gctgatcgtc acggcgattt atgccgcctc ggcgagcaca tggaacgggt

      361 tggcatggat tgtaggcgcc gccctatacc ttgtctgcct ccccgcgttg cgtcgcggtg

      421 catggagccg ggccacctcg acctgaatgg aagccggcgg cacctcgcta acggattcac

      481 cactccaaga attggagcca atcaattctt gcggagaact gtgaatgcgc aaaccaaccc

      541 ttggcagaac atatccatcg cgtccgccat ctccagcagc cgcacgcggc gcatctcggg

      601 cagcgttggg tcctggccac gggtgcgcat gatcgtgctc ctgtcgttga ggacccggct

      661 aggctggcgg ggttgcctta ctggttagca gaatgaatca ccgatacgcg agcgaacgtg

      721 aagcgactgc tgctgcaaaa cgtctgcgac ctgagcaaca acatgaatgg tcttcggttt

      781 ccgtgtttcg taaagtctgg aaacgcggaa gtcagcgccc tgcaccatta tgttccggat