• 规格：20μl质粒
• 启动子：U6 promoter
• 复制子：pUC ori,F1 ori,SV40 ori
• 终止子：cPPT/CTS , 3
• 质粒分类：RNA文库质粒；RNA人源质粒；shRNA人源质粒
• 质粒大小：7083bp
• 原核抗性：Amp（100μg/ml）
• 筛选标记：Puro
• 克隆菌株：Stbl3
• 表达宿主：293T等哺乳细胞
• 诱导方式：无需诱导
• 5测序引物：U6-F（ATGGACTATCATATGCTTACCGTA）
• 3测序引物：pLKO-R（CTGCACTGTACCCCCCAATC）
• 备注：P53序列：NM_000546。 P53-shRNA-427序列：CCGGGTCCAGATGAAGCTCCCAGAACTC GAGTTCTGGGAGCTTCATCTGGACTTTTT
• 质粒简介：          pLKO-p53-shRNA-427质粒是在pLKO.1-Puro载体上克隆了一段shRNA序列得到的一个哺乳细胞慢病毒RNA干扰质粒。U6启动P53shRNA-427的转录，可特异性的干扰P53蛋白的表达。该质粒可作为普通过表达质粒直接转染哺乳细胞，也可包装成慢病毒侵染细胞。质粒本身带有Puro筛选标记，可用嘌呤霉素筛选转染后的细胞得到阳性克隆。
  
• 质粒图谱1： png/1-1F92Q0263O30.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported                7083 bp ds-DNA     circular SYN 28-SEP-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    pLKO.1-p53-shRNA-427

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 7083)

  AUTHORS   MiaoLingBio

  TITLE     Direct Submission

  JOURNAL   Exported Sep 28, 2017 from MiaoLingPlasmid

            http://www.fenghbio.cn

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..7083

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     CDS             529..1128

                     /codon_start=1

                     /gene="pac from Streptomyces alboniger"

                     /product="puromycin N-acetyltransferase"

                     /label=Puro

                     /note="confers resistance to puromycin"

                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER

                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA

                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS

                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"

     LTR             1256..1489

                     /label=3' LTR (Delta-U3)

                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from

                     HIV-1"

     polyA_signal    1561..1682

                     /label=SV40 poly(A) signal

                     /note="SV40 polyadenylation signal"

     rep_origin      1722..1857

                     /label=SV40 ori

                     /note="SV40 origin of replication"

     promoter        complement(1878..1896)

                     /label=T7 promoter

                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"

     primer_bind     complement(1906..1922)

                     /label=M13 fwd

                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants"

     rep_origin      2064..2519

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        2545..2649

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     CDS             2650..3510

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     rep_origin      3681..4269

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     protein_bind    4557..4578

                     /label=CAP binding site

                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"

                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 

                     of cAMP."

     promoter        4593..4623

                     /label=lac promoter

                     /note="promoter for the E. coli lac operon"

     protein_bind    4631..4647

                     /label=lac operator

                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"

                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 

                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 

                     relieved by adding lactose or 

                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

     primer_bind     4655..4671

                     /label=M13 rev

                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants"

     promoter        4692..4710

                     /label=T3 promoter

                     /note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"

     promoter        4736..4964

                     /label=RSV promoter

                     /note="Rous sarcoma virus enhancer/promoter"

     LTR             4965..5145

                     /label=5' LTR (truncated)

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     misc_feature    5192..5317

                     /label=HIV-1 Psi

                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 

                     type 1"

     misc_feature    5810..6043

                     /label=RRE

                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 

                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 

                     cytoplasm."

     promoter        6570..6810

                     /label=U6 Promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     primer_bind     6738..6761

                     /label=U6-F

     misc_feature    6817..6873

                     /label=p53-shRNA-427

                     /note="Gene/Insert name p53-shRNA-427

                     Species H. sapiens (human)

                     Insert Size (bp) 42

                     GenBank IDNM_000546"

     misc_feature    6914..7031

                     /label=cPPT/CTS

                     /note="central polypurine tract and central termination 

                     sequence of HIV-1"

     primer_bind     complement(6932..6951)

                     /label=pLKO-R

     promoter        7080..507

                     /label=hPGK promoter

                     /note="human phosphoglycerate kinase 1 promoter"

ORIGIN

        1 ttggggttgc gccttttcca aggcagccct gggtttgcgc agggacgcgg ctgctctggg

       61 cgtggttccg ggaaacgcag cggcgccgac cctgggtctc gcacattctt cacgtccgtt

      121 cgcagcgtca cccggatctt cgccgctacc cttgtgggcc ccccggcgac gcttcctgct

      181 ccgcccctaa gtcgggaagg ttccttgcgg ttcgcggcgt gccggacgtg acaaacggaa

      241 gccgcacgtc tcactagtac cctcgcagac ggacagcgcc agggagcaat ggcagcgcgc

      301 cgaccgcgat gggctgtggc caatagcggc tgctcagcag ggcgcgccga gagcagcggc

      361 cgggaagggg cggtgcggga ggcggggtgt ggggcggtag tgtgggccct gttcctgccc

      421 gcgcggtgtt ccgcattctg caagcctccg gagcgcacgt cggcagtcgg ctccctcgtt

      481 gaccgaatca ccgacctctc tccccagggg gatccaccgg agcttaccat gaccgagtac

      541 aagcccacgg tgcgcctcgc cacccgcgac gacgtcccca gggccgtacg caccctcgcc

      601 gccgcgttcg ccgactaccc cgccacgcgc cacaccgtcg atccggaccg ccacatcgag

      661 cgggtcaccg agctgcaaga actcttcctc acgcgcgtcg ggctcgacat cggcaaggtg

      721 tgggtcgcgg acgacggcgc cgcggtggcg gtctggacca cgccggagag cgtcgaagcg

      781 ggggcggtgt tcgccgagat cggcccgcgc atggccgagt tgagcggttc ccggctggcc

      841 gcgcagcaac agatggaagg cctcctggcg ccgcaccggc ccaaggagcc cgcgtggttc

      901 ctggccaccg tcggcgtctc gcccgaccac cagggcaagg gtctgggcag cgccgtcgtg

      961 ctccccggag tggaggcggc cgagcgcgcc ggggtgcccg ccttcctgga gacctccgcg

     1021 ccccgcaacc tccccttcta cgagcggctc ggcttcaccg tcaccgccga cgtcgaggtg

     1081 cccgaaggac cgcgcacctg gtgcatgacc cgcaagcccg gtgcctgacg cccgccccac

     1141 gacccgcagc gcccgaccga aaggagcgca cgaccccatg catcggtacc tttaagacca

     1201 atgacttaca aggcagctgt agatcttagc cactttttaa aagaaaaggg gggactggaa

     1261 gggctaattc actcccaacg aagacaagat ctgctttttg cttgtactgg gtctctctgg

     1321 ttagaccaga tctgagcctg ggagctctct ggctaactag ggaacccact gcttaagcct

     1381 caataaagct tgccttgagt gcttcaagta gtgtgtgccc gtctgttgtg tgactctggt

     1441 aactagagat ccctcagacc cttttagtca gtgtggaaaa tctctagcag tagtagttca

     1501 tgtcatctta ttattcagta tttataactt gcaaagaaat gaatatcaga gagtgagagg

     1561 aacttgttta ttgcagctta taatggttac aaataaagca atagcatcac aaatttcaca