• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：博来霉素Zeo，绿色荧光GFP
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：            pLentiCRISPRV2GFP是一个哺乳细胞Cas9和gRNA表达质粒。
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质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               13131 bp ds-DNA     circular SYN 07-JUN-2018

DEFINITION  synthetic circular DNA

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    LentiCRISPRv2GFP

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 13131)

  AUTHORS   Triple Threat

  TITLE     Direct Submission

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..13131

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     promoter        1..241

                     /note="U6 promoter"

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     misc_RNA        266..341

                     /note="gRNA scaffold"

                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 

                     CRISPR/Cas9 system"

     promoter        403..614

                     /note="EF-1-alpha core promoter"

                     /note="core promoter for human elongation factor 

                     EF-1-alpha"

     CDS             639..4742

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /note="Cas9"

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             4743..4790

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /note="nucleoplasmin NLS"

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     CDS             4791..4814

                     /codon_start=1

                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 

                     cleavage site"

                     /note="FLAG"

                     /translation="DYKDDDDK"

     CDS             4824..4880

                     /codon_start=1

                     /product="2A peptide from porcine teschovirus-1 

                     polyprotein"

                     /note="P2A"

                     /note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond 

                     between the Gly and Pro residues, yielding separate 

                     polypeptides."

                     /translation="ATNFSLLKQAGDVEENPGP"

     misc_feature    5616..6204

                     /note="WPRE"

                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 

                     regulatory element"

     LTR             6276..6509

                     /note="3' LTR (Delta-U3)"

                     /note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from

                     HIV-1"

     polyA_signal    6541..6765

                     /note="bGH poly(A) signal"

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     rep_origin      6811..7239

                     /direction=RIGHT

                     /note="f1 ori"

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        7253..7582

                     /note="SV40 promoter"

                     /note="SV40 enhancer and early promoter"

     rep_origin      7433..7568

                     /note="SV40 ori"

                     /note="SV40 origin of replication"

     promoter        7630..7677

                     /note="EM7 promoter"

                     /note="synthetic bacterial promoter "

     CDS             7696..8070

                     /codon_start=1

                     /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"

                     /product="antibiotic-binding protein"

                     /note="Zeo"

                     /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and 

                     Zeocin(TM)"

                     /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD

                     VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR

                     EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"

     polyA_signal    8200..8321

                     /note="SV40 poly(A) signal"

                     /note="SV40 polyadenylation signal"

     rep_origin      complement(8772..9360)

                     /direction=LEFT

                     /note="ori"

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(9531..10391)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /note="AmpR"

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(10392..10496)

                     /gene="bla"

                     /note="AmpR promoter"

     enhancer        10762..11141

                     /note="CMV enhancer"

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        11143..11341

                     /note="CMV promoter"

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     LTR             11359..11539

                     /note="5' LTR (truncated)"

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     misc_feature    11586..11711

                     /note="HIV-1 Psi"

                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 

                     type 1"

     misc_feature    12204..12437

                     /note="RRE"

                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 

                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 

                     cytoplasm."

     misc_feature    12964..13081

                     /note="cPPT/CTS"

                     /note="central polypurine tract and central termination 

                     sequence of HIV-1"

ORIGIN

        1 gagggcctat ttcccatgat tccttcatat ttgcatatac gatacaaggc tgttagagag

       61 ataattagaa ttaatttgac tgtaaacaca aagatattag tacaaaatac gtgacgtaga

      121 aagtaataat ttcttgggta gtttgcagtt ttaaaattat gttttaaaat ggactatcat

      181 atgcttaccg taacttgaaa gtatttcgat ttcttggctt tatatatctt gtggaaagga

      241 cgaaacaccg gagacggacg tctctgtttt agagctagaa atagcaagtt aaaataaggc

      301 tagtccgtta tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg cttttttgaa ttcgctagct

      361 aggtcttgaa aggagtggga attggctccg gtgcccgtca gtgggcagag cgcacatcgc

      421 ccacagtccc cgagaagttg gggggagggg tcggcaattg atccggtgcc tagagaaggt

      481 ggcgcggggt aaactgggaa agtgatgtcg tgtactggct ccgccttttt cccgagggtg

      541 ggggagaacc gtatataagt gcagtagtcg ccgtgaacgt tctttttcgc aacgggtttg

      601 ccgccagaac acaggaccgg ttctagagcg ctgccaccat ggacaagaag tacagcatcg

      661 gcctggacat cggcaccaac tctgtgggct gggccgtgat caccgacgag tacaaggtgc

      721 ccagcaagaa attcaaggtg ctgggcaaca ccgaccggca cagcatcaag aagaacctga

      781 tcggagccct gctgttcgac agcggcgaaa cagccgaggc cacccggctg aagagaaccg

      841 ccagaagaag atacaccaga cggaagaacc ggatctgcta tctgcaagag atcttcagca

      901 acgagatggc caaggtggac gacagcttct tccacagact ggaagagtcc ttcctggtgg

      961 aagaggataa gaagcacgag cggcacccca tcttcggcaa catcgtggac gaggtggcct

     1021 accacgagaa gtaccccacc atctaccacc tgagaaagaa actggtggac agcaccgaca

     1081 aggccgacct gcggctgatc tatctggccc tggcccacat gatcaagttc cggggccact

     1141 tcctgatcga gggcgacctg aaccccgaca acagcgacgt ggacaagctg ttcatccagc

     1201 tggtgcagac ctacaaccag ctgttcgagg aaaaccccat caacgccagc ggcgtggacg