AAV腺相关病毒包装
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技术背景
Technical background
腺相关病毒（AAV）与靶细胞表面的糖化受体结合后，通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞，在内吞形成的内涵体酸化之后，病毒衣壳构象发生变化，使得病毒可以从内涵体脱离，并通过核孔进入细胞核，或经泛素化途径被降解。进入细胞核的AAV颗粒释放目标基因，目标基因在核内聚合酶的作用下形成完整双链，最后经转录、翻译得到目的蛋白。
腺相关病毒（AAV）只有在腺病毒或者疱疹病毒等辅助病毒协助下，宿主才能产生具有感染性的AAV，所以AAV被称作腺相关病毒。典型的AAV2基因组约4800bp，包括2个反向末端重复序列（ITR）和两个读码框（Rep和Cap）。ITR对合成互补DNA链是必需的；Rep和Cap可以翻译成多种不同蛋白。AAV病毒载体系统就是用目的基因替换掉Rep和Cap，然后与表达Rep和Cap基因的质粒共转，从而产生包含目的基因的AAV。
服务特点
service features
1.高安全性和低免疫原性：野生型AAV对人体不致病，重组AAV是三质粒系统，基因组序列上去除了大部分的野生型AAV基因组元件，只有ITR序列，其他各个基因由独立的质粒表达，进一步保证了安全性。AAV进行动物实验时造成的免疫反应小。
2.高组织亲和性：AAV1~AAV9以及DJ、DJ/8、Rh10等12种血清型，不同血清型的AAV可以靶向不同的细胞和组织。
3.感染扩散能力强：AAV体积小、滴度高，在体内扩散能力强，能够穿透血脑屏障，最适合用来感染神经元和胶质细胞。
4.表达稳定，持续时间长：不整合到宿主基因组，可长期稳定表达外源基因，在宿主细胞中形成附加体（episome）存在于细胞核中，体内可持续表达6个月以上。
5.宿主范围广：以感染广泛的哺乳动物并且成功应用于人类和非人类蛋白的表达，不仅可转染分裂细胞，也可转染非分裂细胞。
服务价格与周期、血清型选择
Service Price and Period
丰晖生物AAV血清型推荐：
常见问题解答
Service Description
问题一、 为什么很少用AAV做细胞感染，而更适合做动物实验？
因为AAV感染细胞后的表达效率非常低，在没有辅助病毒或辅助因子的情况下，单链DNA变成双链DNA的过程十分缓慢；另外，体外细胞生长速度快，细胞中感染的AAV会随着细胞分裂不断稀释，进一步导致其表达水平降低。 但在动物实验中，可以利用不同血清型的AAV，特异性靶向不同类型的器官组织，注射的组织细胞通常增殖不会很快，其免疫原性也低于腺病毒，感染效率高于慢病毒，因此表达丰度和持续的时间更好。
问题二、AAV的表达效果能维持多久？
AAV在细胞内主要是以环状的dsDNA附加体（Circularised dsDNA episomes）的形式存在，而不会像慢病毒那样整合到宿主细胞的基因组。对于分裂不旺盛的细胞，如神经元，AAV可持续表达1年以上甚至2年，对于分裂较旺盛的细胞，一般也可维持3~6个月。
问题三、AAV如何保存？保质期多久？如何使用？
收到病毒后，建议马上存放于-80℃,一般腺相关病毒可在-80℃存放12个月，也可在-20℃冷冻保存2~3周。如存放于4℃，需在7天内使用完（在4℃条件下，腺相关病毒比慢病毒相对稳定，一般不会出现显著的活性降低问题）。 使用腺相关病毒时，可从-80℃冰箱取出，冰浴融化，置于4℃备用，并尽快使用。如需要稀释腺相关病毒时，可用PBS稀释。 腺相关病毒较之其他多种病毒更为稳定，尽管反复冻融不会造成其活性显著降低，也请尽量避免反复冻融，建议将腺相关病毒小量分装多管，再放置-80℃冷冻保存。 病毒使用过程中，应避免蛋白酶等污染。腺相关病毒为含有蛋白外壳的病毒载体，蛋白酶会降解它导致其失效。
案例展示
Case presentation
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