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AAV腺相关病毒包装

 

 

 

技术背景

Technical background

 

腺相关病毒(AAV)与靶细胞表面的糖化受体结合后,通过网格蛋白介导的内吞作用进入细胞,在内吞形成的内涵体酸化之后,病毒衣壳构象发生变化,使得病毒可以从内涵体脱离,并通过核孔进入细胞核,或经泛素化途径被降解。进入细胞核的AAV颗粒释放目标基因,目标基因在核内聚合酶的作用下形成完整双链,最后经转录、翻译得到目的蛋白。

腺相关病毒(AAV)只有在腺病毒或者疱疹病毒等辅助病毒协助下,宿主才能产生具有感染性的AAV,所以AAV被称作腺相关病毒。典型的AAV2基因组约4800bp,包括2个反向末端重复序列(ITR)和两个读码框(Rep和Cap)。ITR对合成互补DNA链是必需的;Rep和Cap可以翻译成多种不同蛋白。AAV病毒载体系统就是用目的基因替换掉Rep和Cap,然后与表达Rep和Cap基因的质粒共转,从而产生包含目的基因的AAV。

 
服务特点

service features

 

1.高安全性和低免疫原性:野生型AAV对人体不致病,重组AAV是三质粒系统,基因组序列上去除了大部分的野生型AAV基因组元件,只有ITR序列,其他各个基因由独立的质粒表达,进一步保证了安全性。AAV进行动物实验时造成的免疫反应小。
 
 2.高组织亲和性:AAV1~AAV9以及DJ、DJ/8、Rh10等12种血清型,不同血清型的AAV可以靶向不同的细胞和组织。
 
3.感染扩散能力强:AAV体积小、滴度高,在体内扩散能力强,能够穿透血脑屏障,最适合用来感染神经元和胶质细胞。
 
4.表达稳定,持续时间长:不整合到宿主基因组,可长期稳定表达外源基因,在宿主细胞中形成附加体(episome)存在于细胞核中,体内可持续表达6个月以上。
 
5.宿主范围广:以感染广泛的哺乳动物并且成功应用于人类和非人类蛋白的表达,不仅可转染分裂细胞,也可转染非分裂细胞。
  
 
 
服务价格与周期、血清型选择
Service Price and Period

 

 丰晖生物AAV血清型推荐:

 

 
 
常见问题解答
Service Description
 
 问题一 为什么很少用AAV做细胞感染,而更适合做动物实验?
 
因为AAV感染细胞后的表达效率非常低,在没有辅助病毒或辅助因子的情况下,单链DNA变成双链DNA的过程十分缓慢;另外,体外细胞生长速度快,细胞中感染的AAV会随着细胞分裂不断稀释,进一步导致其表达水平降低。 但在动物实验中,可以利用不同血清型的AAV,特异性靶向不同类型的器官组织,注射的组织细胞通常增殖不会很快,其免疫原性也低于腺病毒,感染效率高于慢病毒,因此表达丰度和持续的时间更好。
 
问题二、AAV的表达效果能维持多久?
 
AAV在细胞内主要是以环状的dsDNA附加体(Circularised dsDNA episomes)的形式存在,而不会像慢病毒那样整合到宿主细胞的基因组。对于分裂不旺盛的细胞,如神经元,AAV可持续表达1年以上甚至2年,对于分裂较旺盛的细胞,一般也可维持3~6个月。
 
 
问题三、AAV如何保存?保质期多久?如何使用?
 
收到病毒后,建议马上存放于-80℃,一般腺相关病毒可在-80℃存放12个月,也可在-20℃冷冻保存2~3周。如存放于4℃,需在7天内使用完(在4℃条件下,腺相关病毒比慢病毒相对稳定,一般不会出现显著的活性降低问题)。 使用腺相关病毒时,可从-80℃冰箱取出,冰浴融化,置于4℃备用,并尽快使用。如需要稀释腺相关病毒时,可用PBS稀释。 腺相关病毒较之其他多种病毒更为稳定,尽管反复冻融不会造成其活性显著降低,也请尽量避免反复冻融,建议将腺相关病毒小量分装多管,再放置-80℃冷冻保存。 病毒使用过程中,应避免蛋白酶等污染。腺相关病毒为含有蛋白外壳的病毒载体,蛋白酶会降解它导致其失效。 
 
 
案例展示
Case presentation
 AAV滴度检测结果
 
 
 
 
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