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技术背景
flow path
慢病毒法是目前应用最普遍的稳株构建方法，它能高效地将目的基因整合到宿主细胞中，通过荧光或抗性标记筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株。但是慢病毒载体中能容纳的基因序列长度有限，当目的基因以及启动子、筛选标记等元件总长度超过6.4kb时，慢病毒的滴度会明显下降或者无法正常进行病毒包装。因此当目的基因片段大于3kb时，我们将使用一种新的转基因载体系统——转座子系统来构建长片段过表达稳株！ 转座子（Transposon）是在宿主细胞基因组中不同位置间可移动的遗传信息元件，由美国科学家Barbara McClintock在研究玉米粒的颜色时发现。转座子系统包括目的基因编码序列以及两端的顺式元件短末端反向重复序列（ITR）、转座酶编码序列。在稳株构建过程中，转座酶通过识别ITRs序列，催化ITRs序列之间的目的基因剪切，经环化后插入到宿主细胞基因组中，从而达到稳定整合的目的。
Preparation and pre experiment
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目的基因整合效率高。转座酶介导的基因插入方式相比于DNA随机整合效率更高。
载体容量大。转座子载体可容纳近200kb的基因片段。
目的基因的表达更加稳定。目的基因以单拷贝的形式整合到宿主细胞基因组中，因此细胞在构建稳株的过程中基因表达更加稳定。.png){kind=small}
实验周期短。利用转座子系统构建稳株无需包装慢病毒，载体构建直接转染。.png){kind=small}
安全性高。转座子系统属于virus-free系统，在临床应用方面更具优势。
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