• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：壮观霉素Spe
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：        pX330S-2是一个哺乳细胞CAS9和gRNA表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G205093142I9.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported                8697 bp ds-DNA     circular SYN 04-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..8697

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        8..293

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer; 

                     contains an 18-bp deletion relative to the standard CMV 

                     enhancer"

     promoter        295..572

                     /label=chicken beta-actin promoter

     intron          573..800

                     /label=hybrid intron

                     /note="hybrid between chicken beta-actin (CBA) and minute 

                     virus of mice (MMV) introns (Gray et al., 2011)"

     regulatory      812..821

                     /regulatory_class="other"

                     /note="vertebrate consensus sequence for strong initiation 

                     of translation (Kozak, 1987)"

     CDS             821..886

                     /codon_start=1

                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an

                     enterokinase cleavage site"

                     /label=3xFLAG

                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"

     CDS             893..913

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             938..5038

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="DKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             5039..5086

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /label=nucleoplasmin NLS

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     polyA_signal    5120..5327

                     /label=bGH poly(A) signal

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     repeat_region   5336..5476

                     /label=AAV2 ITR

                     /note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus 

                     serotype 2"

     rep_origin      5551..6006

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     CDS             6627..7418

                     /codon_start=1

                     /gene="aadA"

                     /product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy, 

                     1985)"

                     /label=Spe

                     /note="confers resistance to spectinomycin and 

                     streptomycin"

                     /translation="MREAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH

                     SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK

                     RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF

                     EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP

                     VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"

     rep_origin      7601..8189

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     promoter        8267..8507

                     /label=U6 promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     misc_RNA        8534..8609

                     /label=gRNA scaffold

                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 

                     CRISPR/Cas9 system"

ORIGIN

        1 tgagacccgt tacataactt acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc

       61 gcccattgac gtcaatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt

      121 atttacggta aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc

      181 ctattgacgt caatgacggt aaatggcccg cctggcattg tgcccagtac atgaccttat

      241 gggactttcc tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtcgagg

      301 tgagccccac gttctgcttc actctcccca tctccccccc ctccccaccc ccaattttgt

      361 atttatttat tttttaatta ttttgtgcag cgatgggggc gggggggggg ggggggcgcg

      421 cgccaggcgg ggcggggcgg ggcgaggggc ggggcggggc gaggcggaga ggtgcggcgg

      481 cagccaatca gagcggcgcg ctccgaaagt ttccttttat ggcgaggcgg cggcggcggc

      541 ggccctataa aaagcgaagc gcgcggcggg cgggagtcgc tgcgcgctgc cttcgccccg

      601 tgccccgctc cgccgccgcc tcgcgccgcc cgccccggct ctgactgacc gcgttactcc

      661 cacaggtgag cgggcgggac ggcccttctc ctccgggctg taattagctg agcaagaggt

      721 aagggtttaa gggatggttg gttggtgggg tattaatgtt taattacctg gagcacctgc

      781 ctgaaatcac tttttttcag gttggaccgg tgccaccatg gactataagg accacgacgg

      841 agactacaag gatcatgata ttgattacaa agacgatgac gataagatgg ccccaaagaa

      901 gaagcggaag gtcggtatcc acggagtccc agcagccgac aagaagtaca gcatcggcct

      961 ggacatcggc accaactctg tgggctgggc cgtgatcacc gacgagtaca aggtgcccag

     1021 caagaaattc aaggtgctgg gcaacaccga ccggcacagc atcaagaaga acctgatcgg

     1081 agccctgctg ttcgacagcg gcgaaacagc cgaggccacc cggctgaaga gaaccgccag

     1141 aagaagatac accagacgga agaaccggat ctgctatctg caagagatct tcagcaacga

     1201 gatggccaag gtggacgaca gcttcttcca cagactggaa gagtccttcc tggtggaaga

     1261 ggataagaag cacgagcggc accccatctt cggcaacatc gtggacgagg tggcctacca

     1321 cgagaagtac cccaccatct accacctgag aaagaaactg gtggacagca ccgacaaggc

     1381 cgacctgcgg ctgatctatc tggccctggc ccacatgatc aagttccggg gccacttcct

     1441 gatcgagggc gacctgaacc ccgacaacag cgacgttgac aagctgttca tccagctggt

     1501 gcagacctac aaccagctgt tcgaggaaaa ccccatcaac gccagcggcg tggacgccaa

     1561 ggccatcctg tctgccagac tgagcaagag cagacggctg gaaaatctga tcgcccagct

     1621 gcccggcgag aagaagaatg gcctgttcgg aaacctgatt gccctgagcc tgggcctgac

     1681 ccccaacttc aagagcaact tcgacctggc cgaggatgcc aaactgcagc tgagcaagga

     1741 cacctacgac gacgacctgg acaacctgct ggcccagatc ggcgaccagt acgccgacct

     1801 gtttctggcc gccaagaacc tgtccgacgc catcctgctg agcgacatcc tgagagtgaa

     1861 caccgagatc accaaggccc ccctgagcgc ctctatgatc aagagatacg acgagcacca

     1921 ccaggacctg accctgctga aagctctcgt gcggcagcag ctgcctgaga agtacaaaga

     1981 gattttcttc gaccagagca agaacggcta cgccggctac attgacggcg gagccagcca

     2041 ggaagagttc tacaagttca tcaagcccat cctggaaaag atggacggca ccgaggaact

     2101 gctcgtgaag ctgaacagag aggacctgct gcggaagcag cggaccttcg acaacggcag

     2161 catcccccac cagatccacc tgggagagct gcacgccatt ctgcggcggc aggaagattt

     2221 ttacccattc ctgaaggaca accgggaaaa gatcgagaag atcctgacct tccgcatccc

     2281 ctactacgtg ggccctctgg ccaggggaaa cagcagattc gcctggatga ccagaaagag

     2341 cgaggaaacc atcaccccct ggaacttcga ggaagtggtg gacaagggcg cttccgccca

     2401 gagcttcatc gagcggatga ccaacttcga taagaacctg cccaacgaga aggtgctgcc

     2461 caagcacagc ctgctgtacg agtacttcac cgtgtataac gagctgacca aagtgaaata