• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：红色荧光蛋白mCherry
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：              pCAS9-mCherry empty哺乳CAS9和gRNA表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G2050Z039648.png

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LOCUS       Exported               10048 bp ds-DNA     circular SYN 30-NOV-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..10048

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     LTR             8..477

                     /note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia 

                     virus"

     CDS             938..1354

                     /label=gag (truncated)

                     /note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag 

                     gene lacking the start codon"

     promoter        1365..1605

                     /label=U6 promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     misc_feature    1614..1710

                     /label=MCS

     enhancer        1712..2091

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        2092..2295

                     /label=CMV promoter

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     CDS             2350..3057

                     /codon_start=1

                     /product="monomeric derivative of DsRed fluorescent protein

                     (Shaner et al., 2004)"

                     /label=mCherry

                     /note="mammalian codon-optimized"

                     /translation="MVSKGEEDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEFEIEGEGEGRPYEG

                     TQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLSFPEGFKWERVMNF

                     EDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEASSERMYPEDGALK

                     GEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSHNEDYTIVEQYERA

                     EGRHSTGGMDELYK"

     CDS             3082..3135

                     /codon_start=1

                     /product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid 

                     protein"

                     /label=T2A

                     /note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond 

                     between the Gly and Pro residues, yielding separate 

                     polypeptides."

                     /translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"

     CDS             3136..7239

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             7252..7272

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     LTR             7329..7922

                     /note="long terminal repeat from Moloney murine leukemia 

                     virus"

     rep_origin      complement(8294..8882)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(9060..9920)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRVDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(9921..10025)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

ORIGIN

        1 ctgcagcctg aatatgggcc aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg ccccggctca

       61 gggccaagaa cagatggaac agctgaatat gggccaaaca ggatatctgt ggtaagcagt

      121 tcctgccccg gctcagggcc aagaacagat ggtccccaga tgcggtccag ccctcagcag

      181 tttctagaga accatcagat gtttccaggg tgccccaagg acctgaaatg accctgtgcc

      241 ttatttgaac taaccaatca gttcgcttct cgcttctgtt cgcgcgcttc tgctccccga

      301 gctcaataaa agagcccaca acccctcact cggggcgcca gtcctccgat tgactgagtc

      361 gcccgggtac ccgtgtatcc aataaaccct cttgcagttg catccgactt gtggtctcgc

      421 tgttccttgg gagggtctcc tctgagtgat tgactacccg tcagcggggg tctttcattt

      481 gggggctcgt ccgggatcgg gagacccctg cccagggacc accgacccac caccgggagg

      541 taagctggcc agcaacttat ctgtgtctgt ccgattgtct agtgtctatg actgatttta

      601 tgcgcctgcg tcggtactag ctagttagct aactagctct gtatctggcg gacccgtggt

      661 ggaactgacg agttctgaac acccggccgc aaccctggga gacgtcccag ggactttggg

      721 ggccgttttt gtggcccgac ctgaggaagg gagtcgatgt ggaatccgac cccgtcagga

      781 tatgtggttc tggtaggaga cgagaaccta aaacagttcc cgcctccgtc tgaatttttg

      841 ctttcggttt ggaaccgaag ccgcgcgtct tgtctgctgc agcatcgttc tgtgttgtct

      901 ctgtctgact gtgtttctgt atttgtctga aaattagggc cagactgtta ccactccctt

      961 aagtttgacc ttagatcact ggaaagatgt cgagcggctc gctcacaacc agtcggtaga

     1021 tgtcaagaag agacgttggg ttaccttctg ctctgcagaa tggccaacct ttaacgtcgg

     1081 atggccgcga gacggcacct ttaaccgaga cctcatcacc caggttaaga tcaaggtctt

     1141 ttcacctggc ccgcatggac acccagacca ggtcccctac atcgtgacct gggaagcctt

     1201 ggcttttgac ccccctccct gggtcaagcc ctttgtacac cctaagcctc cgcctcctct

     1261 tcttccatcc gcgccgtctc tcccccttga acctcctctt tcgaccccgc ctcaatcctc

     1321 cctttatcca gccctcactc cttctctagg cgccggccgg atccgagggc ctatttccca

     1381 tgattccttc atatttgcat atacgataca aggctgttag agagataatt ggaattaatt

     1441 tgactgtaaa cacaaagata ttagtacaaa atacgtgacg tagaaagtaa taatttcttg

     1501 ggtagtttgc agttttaaaa ttatgtttta aaatggacta tcatatgctt accgtaactt

     1561 gaaagtattt cgatttcttg gctttatata tcttgtggaa aggacgaaac accgggccct

     1621 cgatatcgac tagtccgtta tcaacttgaa aaagtggcac cgagtcggtg ctttttttcg

     1681 aattccgatg tacgggccag atatacgcgt tgacattgat tattgtctag ttattaatag

     1741 taatcaatta cggggtcatt agttcatagc ccatatatgg agttccgcgt tacataactt

     1801 acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg

     1861 acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat

     1921 ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct

     1981 attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg

     2041 gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtgatgcgg

     2101 ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact cacggggatt tccaagtctc

     2161 caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa atcaacggga ctttccaaaa

     2221 tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta ggcgtgtacg gtgggaggtc

     2281 tatataagca gagctctctg gctaactaga gaacccactg cttactggct tatcgaaatt

     2341 aagcttccca tggtgagcaa gggcgaggag gataacatgg ccatcatcaa ggagttcatg

     2401 cgcttcaagg tgcacatgga gggctccgtg aacggccacg agttcgagat cgagggcgag

     2461 ggcgagggcc gcccctacga gggcacccag accgccaagc tgaaggtgac caagggtggc

     2521 cccctgccct tcgcctggga catcctgtcc cctcagttca tgtacggctc caaggcctac