• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：               pBK-VRER-BE3是一个大鼠基因哺乳过表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G201162945H0.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported                8532 bp ds-DNA     circular SYN 01-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..8532

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     promoter        132..335

                     /label=CMV promoter

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     promoter        377..395

                     /label=T7 promoter

                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"

     CDS             409..1095

                     /codon_start=1

                     /product="cytidine deaminase (C to U editing enzyme) from 

                     rat"

                     /label=APOBEC-1

                     /note="can use ssDNA as a substrate (Komor et al., 2016)"

                     /translation="MSSETGPVAVDPTLRRRIEPHEFEVFFDPRELRKETCLLYEINWG

                     GRHSIWRHTSQNTNKHVEVNFIEKFTTERYFCPNTRCSITWFLSWSPCGECSRAITEFL

                     SRYPHVTLFIYIARLYHHADPRNRQGLRDLISSGVTIQIMTEQESGYCWRNFVNYSPSN

                     EAHWPRYPHLWVRLYVLELYCIILGLPPCLNILRRKQPQLTFFTIALQSCHYQRLPPHI

                     LWATGLK"

     CDS             1144..5244

                     /codon_start=1

                     /product="Streptococcus pyogenes Cas9 endonuclease with the

                     D1135V/G1218R/R1335E/T1337R mutations"

                     /label=Cas9 VRER

                     /note="has an altered recognition specificity for the 

                     protospacer adjacent motif (PAM) (Kleinstiver et al., 

                     2015)"

                     /translation="DKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFVSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASARELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKEYRSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             5257..5505

                     /codon_start=1

                     /product="uracil-DNA glycosylase inhibitor from a Bacillus 

                     subtilis bacteriophage (Mol et al., 1995)"

                     /label=UGI

                     /translation="TNLSDIIEKETGKQLVIQESILMLPEEVEEVIGNKPESDILVHTA

                     YDESTDENVMLLTSDAPEYKPWALVIQDSNGENKIKML"

     CDS             5518..5538

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             5547..5564

                     /codon_start=1

                     /product="6xHis affinity tag"

                     /label=6xHis

                     /translation="HHHHHH"

     polyA_signal    5593..5817

                     /label=bGH poly(A) signal

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     rep_origin      complement(6290..6878)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(7049..7909)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(7910..8014)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     enhancer        8284..131

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

ORIGIN

        1 atatgccaag tacgccccct attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg

       61 cccagtacat gaccttatgg gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg

      121 ctattaccat ggtgatgcgg ttttggcagt acatcaatgg gcgtggatag cggtttgact

      181 cacggggatt tccaagtctc caccccattg acgtcaatgg gagtttgttt tggcaccaaa

      241 atcaacggga ctttccaaaa tgtcgtaaca actccgcccc attgacgcaa atgggcggta

      301 ggcgtgtacg gtgggaggtc tatataagca gagctggttt agtgaaccgt cagatccgct

      361 agagatccgc ggccgctaat acgactcact atagggagag ccgccaccat gagctcagag

      421 actggcccag tggctgtgga ccccacattg agacggcgga tcgagcccca tgagtttgag

      481 gtattcttcg atccgagaga gctccgcaag gagacctgcc tgctttacga aattaattgg

      541 gggggccggc actccatttg gcgacataca tcacagaaca ctaacaagca cgtcgaagtc

      601 aacttcatcg agaagttcac gacagaaaga tatttctgtc cgaacacaag gtgcagcatt

      661 acctggtttc tcagctggag cccatgcggc gaatgtagta gggccatcac tgaattcctg

      721 tcaaggtatc cccacgtcac tctgtttatt tacatcgcaa ggctgtacca ccacgctgac

      781 ccccgcaatc gacaaggcct gcgggatttg atctcttcag gtgtgactat ccaaattatg

      841 actgagcagg agtcaggata ctgctggaga aactttgtga attatagccc gagtaatgaa

      901 gcccactggc ctaggtatcc ccatctgtgg gtacgactgt acgttcttga actgtactgc

      961 atcatactgg gcctgcctcc ttgtctcaac attctgagaa ggaagcagcc acagctgaca

     1021 ttctttacca tcgctcttca gtcttgtcat taccagcgac tgcccccaca cattctctgg

     1081 gccaccgggt tgaaaagcgg cagcgagact cccgggacct cagagtccgc cacacccgaa

     1141 agtgataaaa agtattctat tggtttagcc atcggcacta attccgttgg atgggctgtc

     1201 ataaccgatg aatacaaagt accttcaaag aaatttaagg tgttggggaa cacagaccgt

     1261 cattcgatta aaaagaatct tatcggtgcc ctcctattcg atagtggcga aacggcagag

     1321 gcgactcgcc tgaaacgaac cgctcggaga aggtatacac gtcgcaagaa ccgaatatgt

     1381 tacttacaag aaatttttag caatgagatg gccaaagttg acgattcttt ctttcaccgt

     1441 ttggaagagt ccttccttgt cgaagaggac aagaaacatg aacggcaccc catctttgga

     1501 aacatagtag atgaggtggc atatcatgaa aagtacccaa cgatttatca cctcagaaaa

     1561 aagctagttg actcaactga taaagcggac ctgaggttaa tctacttggc tcttgcccat

     1621 atgataaagt tccgtgggca ctttctcatt gagggtgatc taaatccgga caactcggat

     1681 gtcgacaaac tgttcatcca gttagtacaa acctataatc agttgtttga agagaaccct

     1741 ataaatgcaa gtggcgtgga tgcgaaggct attcttagcg cccgcctctc taaatcccga

     1801 cggctagaaa acctgatcgc acaattaccc ggagagaaga aaaatgggtt gttcggtaac

     1861 cttatagcgc tctcactagg cctgacacca aattttaagt cgaacttcga cttagctgaa

     1921 gatgccaaat tgcagcttag taaggacacg tacgatgacg atctcgacaa tctactggca

     1981 caaattggag atcagtatgc ggacttattt ttggctgcca aaaaccttag cgatgcaatc

     2041 ctcctatctg acatactgag agttaatact gagattacca aggcgccgtt atccgcttca

     2101 atgatcaaaa ggtacgatga acatcaccaa gacttgacac ttctcaaggc cctagtccgt

     2161 cagcaactgc ctgagaaata taaggaaata ttctttgatc agtcgaaaaa cgggtacgca

     2221 ggttatattg acggcggagc gagtcaagag gaattctaca agtttatcaa acccatatta

     2281 gagaagatgg atgggacgga agagttgctt gtaaaactca atcgcgaaga tctactgcga

     2341 aagcagcgga ctttcgacaa cggtagcatt ccacatcaaa tccacttagg cgaattgcat

     2401 gctatactta gaaggcagga ggatttttat ccgttcctca aagacaatcg tgaaaagatt

     2461 gagaaaatcc taacctttcg cataccttac tatgtgggac ccctggcccg agggaactct

     2521 cggttcgcat ggatgacaag aaagtccgaa gaaacgatta ctccatggaa ttttgaggaa

     2581 gttgtcgata aaggtgcgtc agctcaatcg ttcatcgaga ggatgaccaa ctttgacaag

     2641 aatttaccga acgaaaaagt attgcctaag cacagtttac tttacgagta tttcacagtg

     2701 tacaatgaac tcacgaaagt taagtatgtc actgagggca tgcgtaaacc cgcctttcta

     2761 agcggagaac agaagaaagc aatagtagat ctgttattca agaccaaccg caaagtgaca