• 规格：20μl质粒
• 启动子：T7
• 复制子：pBR322
• 终止子：T7 ter
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 诱导方式：IPTG
• 5测序引物：T7
• 3测序引物：T7-ter
• 质粒简介：          6-His-MBP-TEV-FnCpf1是一个大肠杆菌Cpf1表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G21Z93222938.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               10685 bp ds-DNA     circular SYN 19-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..10685

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     rep_origin      532..1120

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     misc_feature    1306..1445

                     /label=bom

                     /note="basis of mobility region from pBR322"

     CDS             complement(1547..1738)

                     /codon_start=1

                     /gene="rop"

                     /product="Rop protein, which maintains plasmids at low copy

                     number"

                     /label=rop

                     /translation="MTKQEKTALNMARFIRSQTLTLLEKLNELDADEQADICESLHDHA

                     DELYRSCLARFGDDGENL"

     CDS             complement(2547..3629)

                     /codon_start=1

                     /gene="lacI"

                     /product="lac repressor"

                     /label=lacI

                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 

                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 

                     relieved by adding lactose or 

                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL

                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV

                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH

                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA

                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC

                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR

                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"

     promoter        complement(3630..3707)

                     /gene="lacI"

                     /label=lacI promoter

     promoter        4016..4034

                     /label=T7 promoter

                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"

     protein_bind    4035..4059

                     /label=lac operator

                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"

                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 

                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 

                     relieved by adding lactose or 

                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

     RBS             4074..4096

                     /note="efficient ribosome binding site from bacteriophage 

                     T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"

     CDS             4110..4127

                     /codon_start=1

                     /product="6xHis affinity tag"

                     /label=6xHis

                     /translation="HHHHHH"

     misc_feature    4128..5243

                     /label=MBP

     CDS             5244..5261

                     /codon_start=1

                     /product="thrombin recognition and cleavage site"

                     /label=thrombin site

                     /translation="LVPRGS"

     CDS             5268..5288

                     /codon_start=1

                     /product="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and

                     cleavage site"

                     /label=TEV site

                     /translation="ENLYFQG"

     misc_feature    5289..9188

                     /label=FnCpf1 (humanized)

     CDS             9189..9236

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /label=nucleoplasmin NLS

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     CDS             9243..9323

                     /codon_start=1

                     /product="three tandem HA epitope tags"

                     /label=3xHA

                     /translation="YPYDVPDYAYPYDVPDYAYPYDVPDYA"

     terminator      9516..9563

                     /label=T7 terminator

                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA 

                     polymerase"

     rep_origin      9600..10055

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        10081..10185

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     CDS             10186..361

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPAAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

ORIGIN

        1 gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgcagcaa tggcaacaac

       61 gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac aattaataga

      121 ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg

      181 gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtggtagt cgcggtatca ttgcagcact

      241 ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga gtcaggcaac

      301 tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta agcattggta

      361 actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt

      421 taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga

      481 gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc

      541 tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt

      601 ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc

      661 gcagatacca aatactgtcc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc

      721 tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg

      781 cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg

      841 gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga

      901 actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc

      961 ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg

     1021 gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg

     1081 atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt

     1141 tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc

     1201 tgattctgtg gataaccgta ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg

     1261 aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcctga tgcggtattt

     1321 tctccttacg catctgtgcg gtatttcaca ccgcaatggt gcactctcag tacaatctgc

     1381 tctgatgccg catagttaag ccagtataca ctccgctatc gctacgtgac tgggtcatgg

     1441 ctgcgccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt ctgctcccgg

     1501 catccgctta cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag aggttttcac

     1561 cgtcatcacc gaaacgcgcg aggcagctgc ggtaaagctc atcagcgtgg tcgtgaagcg

     1621 attcacagat gtctgcctgt tcatccgcgt ccagctcgtt gagtttctcc agaagcgtta

     1681 atgtctggct tctgataaag cgggccatgt taagggcggt tttttcctgt ttggtcactg

     1741 atgcctccgt gtaaggggga tttctgttca tgggggtaat gataccgatg aaacgagaga

     1801 ggatgctcac gatacgggtt actgatgatg aacatgcccg gttactggaa cgttgtgagg

     1861 gtaaacaact ggcggtatgg atgcggcggg accagagaaa aatcactcag ggtcaatgcc

     1921 agcgcttcgt taatacagat gtaggtgttc cacagggtag ccagcagcat cctgcgatgc

     1981 agatccggaa cataatggtg cagggcgctg acttccgcgt ttccagactt tacgaaacac

     2041 ggaaaccgaa gaccattcat gttgttgctc aggtcgcaga cgttttgcag cagcagtcgc

     2101 ttcacgttcg ctcgcgtatc ggtgattcat tctgctaacc agtaaggcaa ccccgccagc

     2161 ctagccgggt cctcaacgac aggagcacga tcatgcgcac ccgtggggcc gccatgccgg

     2221 cgataatggc ctgcttctcg ccgaaacgtt tggtggcggg accagtgacg aaggcttgag

     2281 cgagggcgtg caagattccg aataccgcaa gcgacaggcc gatcatcgtc gcgctccagc

     2341 gaaagcggtc ctcgccgaaa atgacccaga gcgctgccgg cacctgtcct acgagttgca

     2401 tgataaagaa gacagtcata agtgcggcga cgatagtcat gccccgcgcc caccggaagg

    &nbs