• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：遗传霉素G418
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：         pTE4254是一个哺乳细胞CAS9和gRNA表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G2200U2545F.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported                9204 bp ds-DNA     circular SYN 20-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..9204

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        18..397

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        398..601

                     /label=CMV promoter

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     CDS             716..4078

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     thermophilus Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=St1Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="MSDLVLGLDIGIGSVGVGILNKVTGEIIHKNSRIFPAAQAENNLV

                     RRTNRQGRRLARRKKHRRVRLNRLFEESGLITDFTKISINLNPYQLRVKGLTDELSNEE

                     LFIALKNMVKHRGISYLDDASDDGNSSVGDYAQIVKENSKQLETKTPGQIQLERYQTYG

                     QLRGDFTVEKDGKKHRLINVFPTSAYRSEALRILQTQQEFNPQITDEFINRYLEILTGK

                     RKYYHGPGNEKSRTDYGRYRTSGETLDNIFGILIGKCTFYPDEFRAAKASYTAQEFNLL

                     NDLNNLTVPTETKKLSKEQKNQIINYVKNEKAMGPAKLFKYIAKLLSCDVADIKGYRID

                     KSGKAEIHTFEAYRKMKTLETLDIEQMDRETLDKLAYVLTLNTEREGIQEALEHEFADG

                     SFSQKQVDELVQFRKANSSIFGKGWHNFSVKLMMELIPELYETSEEQMTILTRLGKQKT

                     TSSSNKTKYIDEKLLTEEIYNPVVAKSVRQAIKIVNAAIKEYGDFDNIVIEMARETNED

                     DEKKAIQKIQKANKDEKDAAMLKAANQYNGKAELPHSVFHGHKQLATKIRLWHQQGERC

                     LYTGKTISIHDLINNSNQFEVDHILPLSITFDDSLANKVLVYATANQEKGQRTPYQALD

                     SMDDAWSFRELKAFVRESKTLSNKKKEYLLTEEDISKFDVRKKFIERNLVDTLYASRVV

                     LNALQEHFRAHKIDTKVSVVRGQFTSQLRRHWGIEKTRDTYHHHAVDALIIAASSQLNL

                     WKKQKNTLVSYSEDQLLDIETGELISDDEYKESVFKAPYQHFVDTLKSKEFEDSILFSY

                     QVDSKFNRKISDATIYATRQAKVGKDKADETYVLGKIKDIYTQDGYDAFMKIYKKDKSK

                     FLMYRHDPQTFEKVIEPILENYPNKQINDKGKEVPCNPFLKYKEEHGYIRKYSKKGNGP

                     EIKSLKYYDSKLGNHIDITPKDSNNKVVLQSVSPWRADVYFNKTTGKYEILGLKYADLQ

                     FDKGTGTYKISQEKYNDIKKKEGVDSDSEFKFTLYKNDLLLVKDTETKEQQLFRFLSRT

                     MPKQKHYVELKPYDKQKFEGGEALIKVLGNVANSGQCKKGLGKSNISIYKVRTDVLGNQ

                     HIIKNEGDKPKLDF"

     CDS             4091..4111

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     polyA_signal    4211..4259

                     /label=HSV TK poly(A) signal

                     /note="herpes simplex virus thymidine kinase 

                     polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"

     rep_origin      4461..4889

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        4903..5232

                     /label=SV40 promoter

                     /note="SV40 enhancer and early promoter"

     rep_origin      5083..5218

                     /label=SV40 ori

                     /note="SV40 origin of replication"

     CDS             5299..6093

                     /codon_start=1

                     /gene="aph(3')-II (or nptII)"

                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"

                     /label=Neo

                     /note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418 

                     (Geneticin(R))"

                     /translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP

                     VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS

                     SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ

                     GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA

                     LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"

     polyA_signal    6269..6390

                     /label=SV40 poly(A) signal

                     /note="SV40 polyadenylation signal"

     rep_origin      complement(6841..7429)

                     /direction=LEFT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(7600..8460)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     promoter        complement(8461..8565)

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     promoter        complement(8929..9169)

                     /label=U6 promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

ORIGIN

        1 atgctagttg gcgcgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg

       61 gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc

      121 gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat

      181 agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc

      241 ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga

      301 cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg

      361 gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat

      421 caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt

      481 caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc

      541 cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc

      601 tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggga tccccatcca cgctgttttg acctccatag

      661 aagacaccgg gaccgatcca gcctccggac tctagaggat cgaacccttg ccaccatgag

      721 cgacctggtg ctgggcctgg acatcggcat cggcagcgtg ggcgtgggca tcctgaacaa

      781 ggtgaccggc gagatcatcc acaagaacag tcgcatcttc cctgctgctc aggctgagaa

      841 caacctggtg cgccgcacca accgccaggg tcgccggctt gctcgccgca agaagcaccg

      901 gcgcgtgcgc ctgaaccgcc tgttcgagga gagcggcctg atcaccgact tcaccaagat

      961 cagcatcaac ctgaacccct accagctgcg cgtgaagggc ctgaccgacg agctgagcaa

     1021 cgaggagctg ttcatcgccc tgaagaacat ggtgaagcac cgcggcatca gctacctgga

     1081 cgacgccagc gacgacggca acagcagcgt gggcgactac gcccagatcg tgaaggagaa

     1141 cagcaagcag ctggagacca agacccccgg ccagatccag ctggagcgct accagaccta

     1201 cggccagctg cgcggcgact tcaccgtgga gaaggacggc aagaagcacc gcctgatcaa

     1261 cgtgttcccc accagcgcct accgcagcga ggccctgcgc atcctgcaga cccagcagga

     1321 gttcaacccc cagatcaccg acgagttcat caaccgctac ctggagatcc tgaccggcaa

     1381 gcgcaagtac taccacggcc ccggcaacga gaagagccgc accgactacg gccgctaccg

     1441 caccagcggc gagaccctgg acaacatctt cggcatcctg atcggcaagt gcaccttcta

     1501 ccccgacgag ttccgcgccg ccaaggccag ctacaccgcc caggagttca acctgctgaa

     1561 cgacctgaac aacctgaccg tgcccaccga gaccaagaag ctgagcaagg agcagaagaa

     1621 ccagatcatc aactacgtga agaacgagaa ggccatgggc cccgccaagc tgttcaagta

     1681 catcgccaag ctgctgagct gcgacgtggc cgacatcaag ggctaccgca tcgacaagag

     1741 cggcaaggcc gagatccaca ccttcgaggc ctaccgcaag atgaagaccc tggagaccct

     1801 ggacatcgag cagatggacc gagagaccct ggacaagctg gcctacgtgc tgaccctgaa

     1861 caccgagcgc gagggcatcc aggaggccct ggagcacgag ttcgccgacg gcagcttcag

     1921 ccagaagcag gtggacgagc tggtgcagtt ccgcaaggcc aacagcagca tcttcggcaa

     1981 gggctggcac aacttcagcg tgaagctgat gatggagctg atccccgagc tgtacgagac

     2041 cagcgaggag cagatgacca tcctgacccg cctgggcaag cagaagacca ccagcagcag

     2101 caacaagacc aagtacatcg acgagaagct gctgaccgag gagatctaca accccgtggt

     2161 ggccaagagc gtgcgccagg ccatcaagat cgtgaacgcc gccatcaagg agtacggcga

     2221 cttcgacaac atcgtgatcg agatggcccg cgagaccaac gaggacgacg agaagaaggc

     2281 catccagaag atccagaagg ccaacaagga cgagaaggac gccgccatgc tgaaggccgc

     2341 caaccagtac aacggcaagg ccgagctgcc ccacagcgtg ttccacggcc acaagcagct

     2401 ggccaccaag atccgcctgt ggcaccagca gggcgagcgc tgcctgtaca ccggcaagac

     2461 catcagcatc cacgacctga tcaacaacag caaccagttc gaggtggacc acatcctgcc

     2521 cctgagcatc accttcgacg acagcctggc caacaaggtg ctggtgtacg ccaccgccaa

     2581 ccaggagaag ggccagcgca ccccctacca ggccctggac agcatggacg acgcctggag

     2641 cttccgcgag ctgaaggcct tcgtgcgcga gagcaagacc ctgagcaaca agaagaagga

     2701 gtacctgctg accgaggagg acatcagcaa gttcgacgtg cgcaagaagt tcatcgagcg

     2761 caacctggtg gacaccctct acgccagccg cgtggtgctg aacgccctgc aggagcactt

     2821 ccgcgcccac aagatcgaca ccaaggtgag cgtggtgcgc ggccagttca ccagccagct

     2881 gcgccgccac tggggcatcg agaagacccg cgacacctac caccaccacg ccgtggacgc

     2941 cctgatcatt gcggcttcta gccagctgaa cctgtggaag aagcagaaga acaccctggt