• 商品货号：FH1100

• 规格：10μl质粒
• 启动子：CSPA promoter
• 复制子：ColE1 ori
• 质粒分类：大肠杆菌载体；pCold系列表达质粒
• 质粒大小：5025bp
• 质粒标签：ProS2
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 克隆菌株：大肠杆菌DH5α
• 表达宿主：大肠杆菌
• 5测序引物：pCold-F: 5-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3
• 3测序引物：pCold-R：5-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3
• 质粒简介：         pCold ProS2 DNA 是一种融合的冷休克表达载体，使用来源于革兰氏阴性菌Myxococcus xanthus中的Protein S作为可溶性标签。这种Protein S存在于粘细菌的孢子衣中，由173个氨基酸残基组成，是一种非常稳定的可溶性蛋白质。将两个Protein S的N-末端结构域串联，再结合ProS2 Tag的作用，就能使融合目的蛋白的稳定性和可溶性得到提高。此外，由于目的蛋白和ProS2-Tag的相互作用性很低，因此可以将二者有效分离。pCold ProS2 DNA Vector在cspA启动子的下游插入了5’非编码区(5’-UTR)、翻译增强元件(TEE)、His-Tag序列、ProS2-Tag和多克隆位点(MCS)。在ProS2-Tag和多克隆位点(MCS)之间主要是HRV3C Protease、Thrombin和Factor Xa的切断位点，用来消除融合蛋白质的标签。此外，在cspA启动子下游还插入了lac operator，可以严格调控目的基因的表达。由于本制品的启动子是大肠杆菌来源的，所以大部分大肠杆菌都可以作为表达宿主使用。总之，pCold ProS2 DNAVector提供的冷休克技术，能够促进蛋白质的正确折叠，增加目的蛋白质的可溶性，对于一些棘手的目的蛋白质的表达是一个很好的选择。
   
  
• 质粒图谱1： gif/3-1609131T925I1.gif

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported                5025 bp ds-DNA     circular SYN 19-JAN-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..5025

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     protein_bind    84..100

                     /label=lac operator

                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"

                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 

                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 

                     relieved by adding lactose or 

                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

     CDS             271..288

                     /codon_start=1

                     /product="6xHis affinity tag"

                     /label=6xHis

                     /translation="HHHHHH"

     misc_feature    289..840

                     /label=ProS2

     CDS             850..873

                     /codon_start=1

                     /product="recognition and cleavage site for human 

                     rhinovirus 3C and PreScission proteases"

                     /label=HRV 3C site

                     /translation="LEVLFQGP"

     CDS             883..900

                     /codon_start=1

                     /product="thrombin recognition and cleavage site"

                     /label=thrombin site

                     /translation="LVPRGS"

     CDS             907..918

                     /codon_start=1

                     /product="Factor Xa recognition and cleavage site"

                     /label=Factor Xa site

                     /translation="IEGR"

     rep_origin      complement(1329..1784)

                     /direction=LEFT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        1884..1988

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     CDS             1989..2849

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     rep_origin      3020..3608

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(3780..4862)

                     /codon_start=1

                     /gene="lacI"

                     /product="lac repressor"

                     /label=lacI

                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 

                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 

                     relieved by adding lactose or 

                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

                     /translation="MKPVTLYDVAEYAGVSYQTVSRVVNQASHVSAKTREKVEAAMAEL

                     NYIPNRVAQQLAGKQSLLIGVATSSLALHAPSQIVAAIKSRADQLGASVVVSMVERSGV

                     EACKAAVHNLLAQRVSGLIINYPLDDQDAIAVEAACTNVPALFLDVSDQTPINSIIFSH

                     EDGTRLGVEHLVALGHQQIALLAGPLSSVSARLRLAGWHKYLTRNQIQPIAEREGDWSA

                     MSGFQQTMQMLNEGIVPTAMLVANDQMALGAMRAITESGLRVGADISVVGYDDTEDSSC

                     YIPPLTTIKQDFRLLGQTSVDRLLQLSQGQAVKGNQLLPVSLVKRKTTLAPNTQTASPR

                     ALADSLMQLARQVSRLESGQ"

     promoter        complement(4863..4940)

                     /gene="lacI"

                     /label=lacI promoter

ORIGIN

        1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa

       61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat

      121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt

      181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt

      241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcacat ggcaaatatt

      301 accgttttct ataacgaaga cttccagggt aagcaggtcg atctgccgcc tggcaactat

      361 acccgcgccc agttggcggc gctgggcatc gagaataata ccatcagctc ggtgaaggtg

      421 ccgcctggcg tgaaggctat cctgtaccag aacgatggtt tcgccggcga ccagatcgaa

      481 gtggtggcca atgccgagga gttgggcccg ctgaataata acgtctccag catccgcgtc

      541 atctccgtgc ccgtgcagcc gcgcatggca aatattaccg ttttctataa cgaagacttc

      601 cagggtaagc aggtcgatct gccgcctggc aactataccc gcgcccagtt ggcggcgctg

      661 ggcatcgaga ataataccat cagctcggtg aaggtgccgc ctggcgtgaa ggctatcctc

      721 taccagaacg atggtttcgc cggcgaccag atcgaagtgg tggccaatgc cgaggagctg

      781 ggtccgctga ataataacgt ctccagcatc cgcgtcatct ccgtgccggt gcagccgagg

      841 tccgcgggtc tggaagttct gttccagggg ccctccgcgg gtctggtgcc acgcggtagt

      901 ggtggtatcg aaggtaggca tatggagctc ggtaccctcg agggatccga attcaagctt

      961 gtcgacctgc agtctagata ggtaatctct gcttaaaagc acagaatcta agatccctgc

     1021 catttggcgg ggattttttt atttgttttc aggaaataaa taatcgatcg cgtaataaaa

     1081 tctattatta tttttgtgaa gaataaattt gggtgcaatg agaatgcgca ggccctttcg

     1141 tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt

     1201 cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg

     1261 tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt

     1321 gcaccataaa attgtaaacg ttaatatttt gttaaaattc gcgttaaatt tttgttaaat

     1381 cagctcattt tttaaccaat aggccgaaat cggcaaaatc ccttataaat caaaagaata

     1441 gcccgagata gggttgagtg ttgttccagt ttggaacaag agtccactat taaagaacgt

     1501 ggactccaac gtcaaagggc gaaaaaccgt ctatcagggc gatggcccac tacgtgaacc

     1561 atcacccaaa tcaagttttt tggggtcgag gtgccgtaaa gcactaaatc ggaaccctaa

     1621 agggagcccc cgatttagag cttgacgggg aaagccggcg aacgtggcga gaaaggaagg

     1681 gaagaaagcg aaaggagcgg gcgctagggc gctggcaagt gtagcggtca cgctgcgcgt

     1741 aaccaccaca cccgccgcgc ttaatgcgcc gctacagggc gcgtactatg gttgctttga

     1801 cgtatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc gtaaggagaa aataccgcat caggcgtcag

     1861 gtggcacttt tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt

     1921 caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa

     1981 ggaagagtat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt

     2041 gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt

     2101 tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt

     2161 ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg

     2221 tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga

     2281 atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa

     2341 gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga

     2401 caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa

     2461 ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca

     2521 ccacgatgcc tgtagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta

     2581 ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac

     2641 ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc

     2701 gtgggtctcg cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag

     2761 ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga

     2821 taggtgcctc actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt

     2881 agattgattt aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata

     2941 atctcatgac caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag

     3001 aaaagatcaa aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa

     3061 caaaaaaacc accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt

     3121 ttccgaaggt aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgttctt ctagtgtagc

     3181 cgtagttagg ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa

     3241 tcctgttacc agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa

     3301 gacgatagtt accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc

     3361 ccagcttgga gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa

     3421 gcgccacgct tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa

     3481 caggagagcg cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg

     3541 ggtttcgcca cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc

     3601 tatggaaaaa cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg

     3661 ctcacatagt catgccccgc gcccaccgga aggagctgac tgggttgaag gctctcaagg

     3721 gcatcggtcg agatcccggt gcctaatgag tgagctaact tacattaatt gcgttgcgct

     3781 cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac

     3841 gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gccagggtgg tttttctttt caccagtgag

     3901 acgggcaaca gctgattgcc cttcaccgcc tggccctgag agagttgcag caagcggtcc

     3961 acgctggttt gccccagcag gcgaaaatcc tgtttgatgg tggttaacgg cgggatataa

     4021 catgagctgt cttcggtatc gtcgtatccc actaccgaga tatccgcacc aacgcgcagc

     4081 ccggactcgg taatggcgcg cattgcgccc agcgccatct gatcgttggc aaccagcatc

     4141 gcagtgggaa cgatgccctc attcagcatt tgcatggttt gttgaaaacc ggacatggca

     4201 ctccagtcgc cttcccgttc cgctatcggc tgaatttgat tgcgagtgag atatttatgc

     4261 cagccagcca gacgcagacg cgccgagaca gaacttaatg ggcccgctaa c