• 规格：20μl质粒
• 启动子：EF-1α core promoter
• 复制子：Ori，F1 ori，SV40 ori
• 终止子：WPRE
• 质粒分类：哺乳细胞质粒；哺乳编辑质粒；哺乳Cas9质粒
• 质粒大小：13177bp
• 质粒标签：C-nucleoplasmin NLS，C-FLAG，C-EGFP
• 原核抗性：氨苄青霉素Amp
• 筛选标记：博来霉素Zeo
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 表达宿主：293T等哺乳细胞
• 质粒简介：           Expresses human codon-optimized S. pyogenes Cas9 protein and EGFP from EFS promoter. 3rd generation lentiviral backbone.
            LentiCas9-EGFP质粒的参考文献：Genome-wide CRISPR screen in a mouse model of tumor growth and metastasis. 
• 质粒图谱1： png/1-1FQG43941A0.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               13177 bp ds-DNA    circular SYN 17-八月-2017

KEYWORDS    lentiCas9-EGFP

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 13177)

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..13177

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     enhancer        238..617

                     /note="CMV enhancer"

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"

     promoter        619..817

                     /note="CMV promoter"

                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 

                     promoter"

     LTR             835..1015

                     /note="5' LTR (truncated)"

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     misc_feature    1062..1187

                     /note="HIV-1 Psi"

                     /note="packaging signal of human immunodeficiency virus 

                     type 1"

     misc_feature    1680..1913

                     /note="RRE"

                     /note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for 

                     Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the 

                     cytoplasm."

     misc_feature    2440..2557

                     /note="cPPT/CTS"

                     /note="central polypurine tract and central termination 

                     sequence of HIV-1"

     promoter        2650..2861

                     /note="EF-1-alpha core promoter"

                     /note="core promoter for human elongation factor 

                     EF-1-alpha"

     CDS             2886..6989

                     /codon_start=1

                     /locus_tag="

                     "

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /note="Cas9"

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /protein_id="

                     "

                     /translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             6990..7037

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /note="nucleoplasmin NLS"

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     CDS             7038..7061

                     /codon_start=1

                     /product="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase 

                     cleavage site"

                     /note="FLAG"

                     /translation="DYKDDDDK"

     CDS             7071..7127

                     /codon_start=1

                     /product="2A peptide from porcine teschovirus-1 

                     polyprotein"

                     /note="P2A"

                     /note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond 

                     between the Gly and Pro residues, yielding separate 

                     polypeptides."

                     /translation="ATNFSLLKQAGDVEENPGP"

     CDS             7128..7844

                     /codon_start=1

                     /product="enhanced GFP"

                     /note="EGFP"

                     /note="mammalian codon-optimized"

                     /translation="VSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLK

                     FICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDG

                     NYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKA

                     NFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLE

                     FVTAAGITLGMDELYK"

     misc_feature    7869..8457

                     /note="WPRE"

                     /note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional 

                     regulatory element"

     LTR             8982..9162

                     /note="5' LTR (truncated)"

                     /note="truncated 5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"

     polyA_signal    9194..9418

                     /note="bGH poly(A) signal"

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     rep_origin      9464..9892

                     /direction=RIGHT

                     /note="f1 ori"

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        9906..10235

                     /note="SV40 promoter"

                     /note="SV40 enhancer and early promoter"

     rep_origin      10086..10221

                     /note="SV40 ori"

                     /note="SV40 origin of replication"

     promoter        10283..10330

                     /note="EM7 promoter"

                     /note="synthetic bacterial promoter "

     CDS             10349..10723

                     /codon_start=1

                     /gene="Sh ble from Streptoalloteichus hindustanus"

                     /product="antibiotic-binding protein"

                     /note="Zeo"

                     /note="confers resistance to bleomycin, phleomycin, and 

                     Zeocin(TM)"

                     /translation="MAKLTSAVPVLTARDVAGAVEFWTDRLGFSRDFVEDDFAGVVRDD

                     VTLFISAVQDQVVPDNTLAWVWVRGLDELYAEWSEVVSTNFRDASGPAMTEIGEQPWGR

                     EFALRDPAGNCVHFVAEEQD"

     polyA_signal    10853..10974

                     /note="SV40 poly(A) signal"

                     /note="SV40 polyadenylation signal"

     rep_origin      complement(11425..12013)

                     /direction=LEFT

                     /note="ori"

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     CDS             complement(12184..13044)

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamas