• 规格：20μl质粒
• 质粒图谱1： png/1-1F924201636131.png

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LOCUS       Exported                9211 bp ds-DNA     circular SYN 24-SEP-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

ACCESSION   .

VERSION     .

KEYWORDS    .

SOURCE      synthetic DNA construct

  ORGANISM  synthetic DNA construct

REFERENCE   1  (bases 1 to 9211)

  AUTHORS   .

  TITLE     Direct Submission

  JOURNAL   Exported Sep 24, 2017 from MiaoLingPlasmid

            http://www.fenghbio.cn

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..9211

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     promoter        1..241

                     /label=U6 promoter

                     /note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"

     misc_RNA        268..343

                     /label=gRNA scaffold

                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 

                     CRISPR/Cas9 system"

     misc_feature    428..475

                     /label=MCS

     enhancer        476..761

                     /label=CMV enhancer

                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer; 

                     contains an 18-bp deletion relative to the standard CMV 

                     enhancer"

     promoter        763..1040

                     /label=chicken beta-actin promoter

     intron          1041..1269

                     /label=hybrid intron

                     /note="hybrid between chicken beta-actin (CBA) and minute 

                     virus of mice (MMV) introns (Gray et al., 2011)"

     CDS             1290..1355

                     /codon_start=1

                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an

                     enterokinase cleavage site"

                     /label=3xFLAG

                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"

     CDS             1362..1382

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             1407..5507

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="DKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKN

                     LIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEESF

                     LVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIKF

                     RGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLE

                     NLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQI

                     GDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQ

                     QLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLR

                     KQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGN

                     SRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEYF

                     TVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFDS

                     VEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEERL

                     KTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQ

                     LIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRH

                     KPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYL

                     YYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPS

                     EEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKHV

                     AQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYLN

                     AVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKTE

                     ITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKE

                     SILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGIT

                     IMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNEL

                     ALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADA

                     NLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLD

                     ATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             5508..5555

                     /codon_start=1

                     /product="bipartite nuclear localization signal from 

                     nucleoplasmin"

                     /label=nucleoplasmin NLS

                     /translation="KRPAATKKAGQAKKKK"

     CDS             5571..5624

                     /codon_start=1

                     /product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid 

                     protein"

                     /label=T2A

                     /note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond 

                     between the Gly and Pro residues, yielding separate 

                     polypeptides."

                     /translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"

     CDS             5625..6224

                     /codon_start=1

                     /gene="pac from Streptomyces alboniger"

                     /product="puromycin N-acetyltransferase"

                     /label=PuroR

                     /note="confers resistance to puromycin"

                     /translation="MTEYKPTVRLATRDDVPRAVRTLAAAFADYPATRHTVDPDRHIER

                     VTELQELFLTRVGLDIGKVWVADDGAAVAVWTTPESVEAGAVFAEIGPRMAELSGSRLA

                     AQQQMEGLLAPHRPKEPAWFLATVGVSPDHQGKGLGSAVVLPGVEAAERAGVPAFLETS

                     APRNLPFYERLGFTVTADVEVPEGPRTWCMTRKPGA"

     polyA_signal    6258..6465

                     /label=bGH poly(A) signal

                     /note="bovine growth hormone polyadenylation signal"

     repeat_region   6474..6614

                     /label=AAV2 ITR

                     /note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus 

                     serotype 2"

     rep_origin      6689..7144

                     /direction=RIGHT

                     /label=f1 ori

                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow 

                     indicates direction of (+) strand synthesis"

     promoter        7426..7530

                     /gene="bla"

                     /label=AmpR promoter

     CDS             7531..8391

                     /codon_start=1

                     /gene="bla"

                     /product="beta-lactamase"

                     /label=AmpR

                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and

                     related antibiotics"

                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI

                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS

                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW

                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA

                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS

                     LIKHW"

     rep_origin      8562..9150

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

ORIGIN

        1 gagggcctat ttcccatgat tccttcatat ttgcatatac gatacaaggc tgttagagag

       61 ataattggaa ttaatttgac tgtaaacaca aagatattag tacaaaatac gtgacgtaga

      121 aagtaataat ttcttgggta gtttgcagtt ttaaaattat gttttaaaat ggactatcat

      181 atgcttaccg taacttgaaa gtatttcgat ttcttggctt tatatatctt gtggaaagga

      241 cgaaacaccg ggtcttcgag aagacctgtt ttagagctag aaatagcaag ttaaaataag

      301 gctagtccgt tatcaacttg aaaaagtggc accgagtcgg tgcttttttg ttttagagct

      361 agaaatagca agttaaaata aggctagtcc gtttttagcg cgtgcgccaa ttctgcagac

      421 aaatggctct agagtcgaca ctagtctcga gatcgataag cttcctagag gtacccgtta

      481 cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt

      541 caatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggagtat ttacggtaaa

      601 ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct attgacgtca

      661 atgacggtaa atggcccgcc tggcattgtg cccagtacat gaccttatgg gactttccta

      721 cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtcgaggtg agccccacgt