• 规格：20μl质粒
• 原核抗性：壮观霉素Spe
• 筛选标记：潮霉素Hyg
• 克隆菌株：大肠杆菌Stbl3
• 质粒简介：          pMonAID_dCas9-PmCDA_Hyg_ALS是一个植物细胞dCAS9和gRNA表达质粒。
• 质粒图谱1： png/1-1G221151551N0.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               19008 bp ds-DNA     circular SYN 21-DEC-2017

DEFINITION  synthetic circular DNA

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..19008

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     misc_feature    113..137

                     /label=RB T-DNA repeat

                     /note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"

     protein_bind    295..316

                     /label=CAP binding site

                     /bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"

                     /note="CAP binding activates transcription in the presence 

                     of cAMP."

     promoter        331..361

                     /label=lac promoter

                     /note="promoter for the E. coli lac operon"

     protein_bind    369..385

                     /label=lac operator

                     /bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"

                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to 

                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be 

                     relieved by adding lactose or 

                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."

     primer_bind     393..409

                     /label=M13 rev

                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants"

     protein_bind    485..509

                     /gene="mutant version of attB"

                     /label=attB1

                     /bound_moiety="BP Clonase(TM)"

                     /note="recombination site for the Gateway(R) BP reaction"

     protein_bind    578..677

                     /gene="mutant version of attL"

                     /label=attL2

                     /bound_moiety="LR Clonase(TM)"

                     /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"

     protein_bind    683..707

                     /gene="mutant version of attB"

                     /label=attB2

                     /bound_moiety="BP Clonase(TM)"

                     /note="recombination site for the Gateway(R) BP reaction"

     misc_RNA        complement(719..794)

                     /label=gRNA scaffold

                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes 

                     CRISPR/Cas9 system"

     protein_bind    complement(1203..1302)

                     /gene="mutant version of attL"

                     /label=attL1

                     /bound_moiety="LR Clonase(TM)"

                     /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"

     primer_bind     1323..1339

                     /label=KS primer

                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar 

                     variants"

     promoter        2111..2156

                     /label=minimal CaMV 35S promoter

                     /note="minimal 35S promoter from cauliflower mosaic virus"

     5'UTR           2167..2267

                     /label=OsADH 5'-UTR

                     /note="translational enhancer from the 5'-UTR of the Oryza 

                     sativa alcohol dehydrogenase gene (Sugio et al., 2008)"

     CDS             2277..2297

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 large T 

                     antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             2322..6425

                     /codon_start=1

                     /product="catalytically dead mutant of the Cas9 

                     endonuclease from the Streptococcus pyogenes Type II 

                     CRISPR/Cas system"

                     /label=dCas9

                     /note="RNA-guided DNA-binding protein that lacks 

                     endonuclease activity due to the D10A mutation in the RuvC 

                     catalytic domain and the H840A mutation in the HNH 

                     catalytic domain"

                     /translation="MDKKYSIGLAIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDAIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             6447..6467

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 large T 

                     antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     CDS             6660..6725

                     /codon_start=1

                     /product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an

                     enterokinase cleavage site"

                     /label=3xFLAG

                     /translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"

     CDS             7359..7379

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 large T 

                     antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     promoter        9657..10002

                     /label=CaMV 35S promoter

                     /note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic

                     virus"

     CDS             10017..11042

                     /codon_start=1

                     /gene="aph(4)-Ia"

                     /product="aminoglycoside phosphotransferase from E. coli"

                     /label=HygR

                     /note="confers resistance to hygromycin"

                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDVGGRG

                     YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRSQGVTLQDLP

                     ETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ

                     TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF

                     GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG

                     NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPRAK

                     K"

     protein_bind    complement(12194..12318)

                     /gene="mutant version of attR"

                     /label=attR2

                     /bound_moiety="LR Clonase(TM)"

                     /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"

     misc_feature    12589..12613

                     /label=LB T-DNA repeat

                &n