• 规格：20μl质粒
• 启动子：CaMV 35S promoter
• 复制子：pUC ori，pVS1 oriV
• 终止子：3A terminator
• 质粒分类：植物系列质粒；植物编辑质粒；植物Cas9质粒
• 质粒标签：C-SV40 NLS
• 原核抗性：壮观霉素Spe
• 筛选标记：潮霉素Hygro，红色荧光蛋白mCherry
• 克隆菌株：Stbl3等大肠杆菌
• 表达宿主：拟南芥等植物
• 诱导方式：无需诱导，组成型表达
• 5测序引物：35S:GACGCACAATCCCACTATCC
• 3测序引物：3A-R：CCATTTGCATTTTGATGTCC
• 质粒简介：           pHDE-35S-Cas9-mCherry质粒可以在植物中表达Cas9酶和mCherry红色荧光蛋白，可视化基因编辑操作。For CRISPR/Cas9 mediated gene editing in Arabidopsis; provides a visual screen for Cas9-free plants.其参考文献是An effective strategy for reliably isolating heritable and Cas9-free Arabidopsis mutants generated by CRISPR/Cas9-mediated genome editing. 
• 质粒图谱1： png/1-1P12G33F11S.png

质粒序列： 点击查看序列

LOCUS       Exported               16086 bp ds-DNA     circular SYN 27-JAN-2018

FEATURES             Location/Qualifiers

     source          1..16086

                     /organism="synthetic DNA construct"

                     /mol_type="other DNA"

     misc_feature    1..25

                     /label=RB T-DNA repeat

                     /note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"

     CDS             271..1197

                     /codon_start=1

                     /label=mCherry

                     /translation="MMSGIVLFVTCHSFPTHNPDNNVRASLSLHTHSCMHAFLHVIAMQ

                     ISFLTYKYKPTLHYTLHSNQNKKTYTNSKTVPTMDNMAIIKEFMRFKVHMEGSVNGHEF

                     EIEGEGEGRPYEGTQTAKLKVTKGGPLPFAWDILSPQFMYGSKAYVKHPADIPDYLKLS

                     FPEGFKWERVMNFEDGGVVTVTQDSSLQDGEFIYKVKLRGTNFPSDGPVMQKKTMGWEA

                     SSERMYPEDGALKGEIKQRLKLKDGGHYDAEVKTTYKAKKPVQLPGAYNVNIKLDITSH

                     NEDYTIVEQYERAEGRHSTGGMDELYK"

     terminator      1203..1455

                     /label=MAS terminator

                     /note="mannopine synthase terminator"

     promoter        2602..2785

                     /function="NOS promoter"

                     /label=NOS promoter

                     /note="nopaline synthase promoter"

     CDS             2837..3862

                     /codon_start=1

                     /label=Hyg

                     /translation="MKKPELTATSVEKFLIEKFDSVSDLMQLSEGEESRAFSFDIGGRG

                     YVLRVNSCADGFYKDRYVYRHFASAALPIPEVLDIGEFSESLTYCISRRAQGVTLQDLP

                     ETELPAVLQPVAEAMDAIAAADLSQTSGFGPFGPQGIGQYTTWRDFICAIADPHVYHWQ

                     TVMDDTVSASVAQALDELMLWAEDCPEVRHLVHADFGSNNVLTDNGRITAVIDWSEAMF

                     GDSQYEVANIFFWRPWLACMEQQTRYFERRHPELAGSPRLRAYMLRIGLDQLYQSLVDG

                     NFDDAAWAQGRCDAIVRSGAGTVGRTQIARRSAAVWTDGCVEVLADSGNRRPSTRPGSW

                     R"

     terminator      3900..4152

                     /label=NOS terminator

                     /note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"

     promoter        4285..4630

                     /label=CaMV 35S promoter

                     /note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic

                     virus"

     CDS             4635..8738

                     /codon_start=1

                     /product="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus 

                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"

                     /label=Cas9

                     /note="generates RNA-guided double strand breaks in DNA"

                     /translation="MDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITDEYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKK

                     NLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMAKVDDSFFHRLEES

                     FLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALAHMIK

                     FRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRL

                     ENLIAQLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQ

                     IGDQYADLFLAAKNLSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVR

                     QQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYIDGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLL

                     RKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYPFLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARG

                     NSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFDKNLPNEKVLPKHSLLYEY

                     FTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKEDYFKKIECFD

                     SVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER

                     LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFM

                     QLIHDDSLTFKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGR

                     HKPENIVIEMARENQTTQKGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLY

                     LYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVDHIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVP

                     SEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGGLSELDKAGFIKRQLVETRQITKH

                     VAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKVREINNYHHAHDAYL

                     NAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIMNFFKT

                     EITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSK

                     ESILPKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGI

                     TIMERSSFEKNPIDFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNE

                     LALPSKYVNFLYLASHYEKLKGSPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILAD

                     ANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTLTNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVL

                     DATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGD"

     CDS             8751..8771

                     /codon_start=1

                     /product="nuclear localization signal of SV40 (simian virus

                     40) large T antigen"

                     /label=SV40 NLS

                     /translation="PKKKRKV"

     misc_feature    9521..9545

                     /label=LB T-DNA repeat

                     /note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"

     CDS             10073..10864

                     /codon_start=1

                     /gene="aadA"

                     /product="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy, 

                     1985)"

                     /label=Spe

                     /note="confers resistance to spectinomycin and 

                     streptomycin"

                     /translation="MGEAVIAEVSTQLSEVVGVIERHLEPTLLAVHLYGSAVDGGLKPH

                     SDIDLLVTVTVRLDETTRRALINDLLETSASPGESEILRAVEVTIVVHDDIIPWRYPAK

                     RELQFGEWQRNDILAGIFEPATIDIDLAILLTKAREHSVALVGPAAEELFDPVPEQDLF

                     EALNETLTLWNSPPDWAGDERNVVLTLSRIWYSAVTGKIAPKDVAADWAMERLPAQYQP

                     VILEARQAYLGQEEDRLASRADQLEEFVHYVKGEITKVVGK"

     rep_origin      11108..11696

                     /direction=RIGHT

                     /label=ori

                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 

                     replication"

     misc_feature    11882..12022

                     /label=bom

                     /note="basis of mobility region from pBR322"

     rep_origin      12366..12560

                     /label=pVS1 oriV

                     /note="origin of replication for the Pseudomonas plasmid 

                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"

     CDS             complement(12626..13693)

                     /codon_start=1

                     /product="replication protein from the Pseudomonas plasmid 

                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"

                     /label=pVS1 RepA

                     /translation="GRKPSGPVQIGAALGDDLVEKLKAAQAAQRQRIEAEARPGESWQA

                     AADRIRKESRQPPAAGAPSIRKPPKGDEQPDFFVPMLYDVGTRDSRSIMDVAVFRLSKR

                     DRRAGEVIRYELPDGHVEVSAGPAGMASVWDYDLVLMAVSHLTESMNRYREGKGDKPGR

                     VFRPHVADVLKFCRRADGGKQKDDLVETCIRLNTTHVAMQRTKKAKNGRLVTVSEGEAL

                     ISRYKIVKSETGRPEYIEIELADWMYREITEGKNPDVLTVHPDYFLIDPGIGRFLYRLA

                     RRAAGKAEARWLFKTIYERSGSAGEFKKFCFTVRKLIGSNDLPEYDLKEEAGQAGPILV

                     MRYRNLIEGEASAGS"

     CDS             complement(14127..14756)

                     /codon_start=1

                     /product="stability protein from the Pseudomonas plasmid 

                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"

                     /label=pVS1 StaA

                     /translation="MKVIAVLNQKGGSGKTTIATHLARALQLAGADVLLVDSDPQGSAR

                     DWAAVREDQPLTVVGIDRPTIDRDVKAIGRRDFVVIDGAPQAADLAVSAIKAADFVLIP

                     VQPSPYDIWATADLVELVKQRIEVTDGRLQAAFVVSRAIKGTRIGGEVAEALAGYELPI

                     LESRITQRVSYPGTAAAGTTVLESEPEGDAAREVQALAAEIKSKLI"

ORIGIN

        1 gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactagtgaa gtgaagcttg

       61 gtctcaacta tgagacctaa gctggcacaa ctatatttcc aacatcacta gctaccatca

      121 aaagattgac ttctcatctt actcgattga aaccaaatta acatagggtt tttatttaaa

      181 taaaagttta accttctttt taaaaaattg ttcatagtgt catgtcagaa caagagctac

      241 aaatcacaca tagcatgcat aagcggagct atgatgagtg gtattgtttt gttcgtcact

      301 tgtcactctt ttccaacaca taatcccgac aacaacgtaa gagcatctct ctctctccac

      361 acacactcat gcatgcatgc attcttacac gtgattgcca tgcaaatctc ctttctcacc

      421 tataaataca aaccaaccct tcactacact cttcactcaa accaaaacaa gaaaacatac

      481 acaaatagca aaacggtacc aacaatggat aacatggcca tcatcaagga gttcatgcgc

      541 ttcaaggtgc acatggaggg ctccgtgaac ggccacgagt tcgagatcga gggcgagggc

      601 gagggccgcc cctacgaggg cacccagacc gccaagctga aggtgaccaa gggtggcccc

      661 ctgcccttcg cctgggacat cctgtcccct cagttcatgt acggctccaa ggcctacgtg

      721 aagcaccccg ccgacatccc cgactacttg aagctgtcct tccccgaggg cttcaagtgg

      781 gagcgcgtga tgaacttcga ggacggcggc gtggtgaccg tgacccagga ctcctccctg

      841 caggacggcg agttcatcta caaggtgaag ctgcgcggca ccaacttccc ctccgacggc

      901 cccgtaatgc agaagaagac catgggctgg gaggcctcct ccgagcggat gtaccccgag

      961 gacggcgccc tgaagggcga gatcaagcag aggctgaagc tgaaggacgg cggccactac