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慢病毒包装常见问题

 

 

Q1.
什么是MOI值？
MOI(病毒感染复数)，一般认为其是一个比值，没有单位，其实其隐藏的单位是pfu number/cell。MOI的含义是感染时病毒与细胞量的比值，即MOI=病毒滴度x体积/细胞数量。
Q2.
慢病毒如何稀释？
用常规培养基/生理盐水/Hanks/PBS液等将慢病毒稀释到需要的滴度(可按照10倍梯度稀释)。

 

 

 

 

 

 

 

 

Q3.
Q3.加入慢病毒后，细胞死亡，如何处理？
这种情况是由于慢病毒对细胞具有一定的毒性，需要调整并降低感染的MOI值，并且感染后，定时观察细胞状态，若细胞状态差，则需对细胞进行换液操作，用新鲜的完全培养基替换病毒感染培养液。

 

 

 

 

 

Q4
如何确定慢病毒感染靶细胞的感染效率？
慢病毒感染靶细胞的感染效率可通过qPCR检测靶细胞中的慢病毒载体拷贝数来计算。另外如果构建的慢病毒载体带有标记基因（如GFP、RFP等）则可以通过荧光显微镜下观察进而评估感染效率。
Q5.
慢病毒感染细胞后什么时候的基因表达到达峰值？
细胞感染后48-72 h能够观察到荧光，部分难感染的细胞需要96 h或更长，可进行抗性筛选增加阳性细胞比例。

 

 

（病毒感染示意图）

 

 

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